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原发性肝癌是世界最常见的恶性肿瘤之一。流行病学调查结果显示,其发病率及死亡率均有上升趋势,严重危害人类健康。目前缺乏有效治疗药物,已知化疗药物有效率不超过20%,靶向药物如多激酶抑制剂索拉菲尼未能显著改善肝癌的治疗现状。寻找、研究有效的抗肝癌药物一直是肝癌治疗的热点问题。作为我国民间重要的药用抗肿瘤真菌,槐耳高效低毒的抗肿瘤特性一直受到人们的关注,基础研究表明槐耳能够增强机体免疫功能、抑制肿瘤血管生成、促进肿瘤细胞凋亡、对化疗药物有增敏和逆转其耐药作用,表现出多靶位的抗肿瘤功效。临床研究表明槐耳对原发性肝癌有独特的疗效,但具体机制尚未明确。Hippo通路是新发现的生长控制信号通路,它通过限制细胞增殖和促进细胞调亡来调控器官大小和发育。YAP(Yes-associated protein)是Hippo通路下游的一个转录激活子,在人肝癌细胞中大量表达,与肝癌发生密切相关。新近研究表明YAP的致癌性与其磷酸化水平有关,磷酸化后的YAP蛋白(P-YAP)可以抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。目的:本实验主要研究不同浓度的槐耳清膏对人肝癌HepG-2细胞增殖、凋亡及P-YAP蛋白表达的影响,初步探讨槐耳清膏抗肝癌的可能作用机制。方法:1.不同浓度槐耳清膏作用HepG-2细胞48h,采用倒置显微镜观察槐耳清膏对HepG-2细胞形态的影响。2.不同浓度槐耳清膏作用HepG-2细胞12h、24h、48h,采用CCK-8法观察槐耳清膏对HepG-2细胞增殖的影响。3.不同浓度槐耳清膏作用HepG-2细胞24h、48h,采用AnnexinV/PI双染色法检测槐耳清膏对HepG-2细胞凋亡的影响。4.不同浓度槐耳清膏作用HepG-2细胞1h、12h、24h,采用蛋白免疫印迹法(western blot)分析槐耳清膏对HepG-2细胞P-YAP蛋白水平表达的影响。结果:1.在倒置光学显微镜下,观察到槐耳清膏作用HepG-2细胞后梭型细胞体积逐渐缩小,胞膜皱折,松散成个体漂浮,散在分布。2.CCK-8增殖抑制试验结果显示:槐耳清膏能够显著抑制HepG-2细胞的增殖(P<0.05),呈时间和剂量依赖性。3. AnnexinV/PI双染色法试验结果显示:槐耳清膏能够促进HepG-2细胞的凋亡(P<0.05),呈时间和剂量依赖性。4. Western Blot实验结果显示:槐耳清膏作用HepG-2细胞1h,能够上调P-YAP蛋白的表达(P<0.05),呈剂量依赖性。槐耳清膏作用HepG-2细胞12h,P-YAP蛋白无明显影响,与对照组无显著差异(P>0.05),槐耳清膏作用HepG-2细胞24h,能够下调P-YAP蛋白的表达(P<0.05),呈剂量依赖性。结论:槐耳清膏能够抑制HepG-2细胞的增殖,诱导HepG-2细胞凋亡,呈时间和剂量依赖性,上调P-YAP蛋白的表达可能是槐耳清膏早期抗肝癌药效机制之一,随着时间条件改变,槐耳清膏可能启动了不同的抗肿瘤机制。