大麦根特异基因的筛选鉴定及启动子分析

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植物的根具有吸收养分、水和固定植物的作用,还能在病菌、干旱、盐碱等多种生物和非生物胁迫环境条件下,对植物的地上部分起到一定的保护作用,对于植物的生长发育具有重要的生物学意义。植物生长发育的本质是基因在一定时间和空间上程序性表达的结果,植物特异性启动子作为重要的转录调控元件,控制基因在特定组织、不同发育阶段以及环境条件下表达。分离植物根特异表达基因及其启动子,对于探讨根发育的分子机制以及挖掘有应用价值的植物基因工程调控元件具有重要的科学意义。本研究主要研究结果如下:  (1)利用数字化差异显示技术(Digital Differential Display,简称DDD)结合大麦芯片数据,在基因组水平上大批量筛选根特异表达基因,得到62个根特异性候选基因。采用荧光定量PCR方法检测62个候选基因在根、茎、叶、花、种子和茎节等6个组织器官的差异表达情况,发现其中12个为根特异性表达基因。  (2)利用荧光定量PCR方法分析了12个根特异表达基因在200mmol NaCl、20%PEG、0.1mmol ABA和0.1mmol AlCl3+0.5mmol MnCl3等四种实验处理条件下2h和10h的表达情况。  (3)利用PCR方法克隆了Hv TIP2;1基因编码区上游的启动子序列Hv1310p,该序列含有多个与根特异表达和胁迫响应有关的顺式作用元件。通过5端缺失法分别构建启动子长度为514bp和1258bp的融合gus报告基因表达载体,转基因烟草的GUS活性检测表明两个启动子片段都具有根特异性的启动活性。本实验为深入研究根发育相关基因的功能、发掘新的根特异性启动子提供了基因资源和有效方法。
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