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目的:以经典的骨髓增殖性肿瘤(MPN)为研究对象,分别探讨流式细胞学技术检测慢性髓性白血病(CML)患者细胞磷酸化酪氨酸水平的可行性、敏感性和随访过程中的变化情况。对Bcr-abl阴性MPN患者的JAK2突变检测手段进行比较,并探讨各自的优势。
方法:采用直接荧光标记法、以异硫氰酸荧光素(FITC)耦合的酪氨酸激酶抗体对外周血粒细胞进行胞浆染色,并以荧光微球的荧光强度作为参照,计算出相对荧光单位(RFU),CML患者病程中重复检测,做随访分析。分别利用限制性片段多态性(RFLP)、小沟结合物(MGB)探针以及基因测序检测69例MPN患者的JAK2V617F突变情况。
结果:⑴CML组RFU值明显高于对照组(P<0.001);疾病进展期患者RFU值明显高于慢性期患者(P<0.05)。⑵69例MPN患者JAK2V617F总突变率为44.7%,发现一例新型JAK2突变,突变位于内含子剪接区。
结论:用流式细胞术检测磷酸化酪氨酸激酶强度,是一个可信和简便的CML辅助诊断手段;并且在患者疗效判断和随访中有一定的意义。RFLP以及MGB探针法灵敏度均较高。直接测序可以发现常规检查无法识别的突变形式。