【摘 要】
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目的:初步探讨菟丝子总黄酮通过GPRC6A改善少弱精子症的可能作用机制。方法:1)将大鼠随机分成空白对照(blank control,BC)组、模型(model,M)组、菟丝子总黄酮(total flavonoids from semen Cuscutae,TFSC)组和骨钙素(osteocalcin,OCN)组。除BC组外,均用环磷酰胺建立少弱精子症大鼠模型,造模后TFSC组和OCN组大鼠分别继
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目的:初步探讨菟丝子总黄酮通过GPRC6A改善少弱精子症的可能作用机制。方法:1)将大鼠随机分成空白对照(blank control,BC)组、模型(model,M)组、菟丝子总黄酮(total flavonoids from semen Cuscutae,TFSC)组和骨钙素(osteocalcin,OCN)组。除BC组外,均用环磷酰胺建立少弱精子症大鼠模型,造模后TFSC组和OCN组大鼠分别继续给予TFSC和OCN干预,记录各组大鼠体重变化、睾丸指数和股骨指数,计数精子数目和活动率;2)光镜下检测睾丸和股骨的形态学变化,电镜下检测睾丸的微细结构改变;3)通过RT-qPCR检测睾丸组织中gprc6a、ocn和生精相关基因creb、cyp11a1的表达水平,检测股骨组织中gprc6a和ocn的表达水平;4)通过Western Blot检测睾丸组织中GPRC6A和生精相关蛋白CREB、CYP11A1和StAR的表达情况;5)通过ELISA检测血清中LH、FSH、T和OCN的含量。结果:1)造模后BC组大鼠体重高于M组、TFSC组和OCN组(P<0.05);M组大鼠精子数目和活动率低于BC组(P<0.05),成功构建少精子症模型;TFSC和OCN精子数目和活动率均高于M组(P<0.05);OCN组大鼠睾丸指数低于M组(P<0.05);各组大鼠股骨指数间的差异无统计学意义(P>0.05);2)光镜下可见M组大鼠睾丸的组织结构出现损伤,各级生精细胞层数减少,管腔内精子细胞稀疏;TFSC组和OCN组大鼠睾丸组织形态与BC组无显著差异,结构完整,各级生精细胞紧密排列,管腔内精子细胞数量多;电镜下可见M组睾丸组织各级生精细胞内细胞器数目明显减少,线粒体偶有畸形,BC组、TFSC组和OCN组的睾丸组织微细结构更完整,生精小管基膜连续,各级生精细胞细胞器数量丰富。光镜下各组大鼠股骨的形态无显著差异,均可见不太规则的内环骨板和哈弗斯系统;3)RT-qPCR结果显示,在睾丸组织中,M组gprc6a的表达水平比BC组低(P<0.05);OCN组ocn的表达水平比BC组高(P<0.05);TFSC组creb的表达水平比M组高(P<0.05)。在股骨组织中,各组大鼠gprc6a表达水平的差异无统计学意义(P>0.05);M组大鼠股骨ocn的基因表达量低于BC组、TFSC组和OCN组(P<0.05);4)Western Blot结果显示,TFSC组和BC组的大鼠睾丸GPRC6A、CREB和CYP11A1的蛋白表达量比M组高(P<0.05);TFSC组大鼠睾丸StAR的蛋白表达量高于M组、OCN组和BC组(P<0.05);M组大鼠睾丸StAR的蛋白表达量低于BC组(P<0.05);5)M组大鼠血清中LH和FSH的含量比TFSC组、OCN组和BC组高(P<0.05),BC组大鼠血清中LH和FSH的含量比TFSC组和OCN组低(P<0.05);M组大鼠血清中T的含量比BC组高(P<0.05);M组大鼠血清中OCN的含量比TFSC组、OCN组和BC组低(P<0.05),OCN组大鼠血清中OCN的含量比TFSC组和BC组高(P<0.05)。结论:1)TFSC和OCN都对少弱精子症有一定治疗作用,TFSC的作用更显著;2)TFSC可能通过促进gprc6a在睾丸的表达以及GPRC6A、CREB、CYP11A1和StAR等蛋白在睾丸的表达,影响睾丸间质细胞合成和分泌T,进一步影响生精功能,起到改善少弱精子症的作用。
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