内源性逆转录病毒(Endogenous retrovirus,ERVs)为β逆转录病毒,其基因在相当一部分动物的基因组中已经普遍存在。一些内源性逆转录病毒与其宿主胎盘的发育关系紧密。迄今为止在绵羊基因组中已经发现了最少27个拷贝数的内源性逆转录病毒,这些内源性逆转录病毒与其对应的外源性逆转录病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)相关性很大,所以称其为内源性绵羊肺腺瘤病毒(Endogenous jaagsiekte sheep retrovirus,enJSRV)。enJSRV在绵羊胎盘形成过程中有重要的作用,并且enJSRV囊膜蛋白(Env)能够在绵羊绒毛膜滋养层细胞融合过程中起促进作用,但是enJSRV囊膜蛋白的作用机制尚不明确。为了进一步去了解enJSRV以及囊膜蛋白的作用机制,本试验通过对OPA(Ovine pulmonary adenocarcinoma,OPA)病羊肺组织BAC文库的筛选、克隆enJSRV全基因组序列,针对env基因分析其结构、构建原核表达质粒,并诱导囊膜蛋白表达。根据GenBank中提供的内源性绵羊肺腺瘤病毒DNA序列(AF152615)设计引物,采用PCR方法进行序列扩增并克隆,并对克隆结果进行测序和生物信息学分析。然后将添加了BamHⅠ和HindⅢ酶切位点的env基因片段克隆至pET-32a载体构建表达质粒,并将质粒转化至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中诱导囊膜蛋白表达,最后利用SDS-PAGE电泳及Western blot技术检测、鉴定囊膜蛋白,并经过镍柱亲和层析纯化出囊膜蛋白。本研究结果表明,enJSRV序列长7382bp,其中env基因片段长1836bp,enJSRV与enJSRV-23同源性为97.3%。PSORTⅡ及DNAStar等软件预测分析enJSRV囊膜蛋白主要定位于细胞质、线粒体内膜等位置,且存在多个抗原表位。在37℃条件下,0.5 mmol/L IPTG诱导转入pET32-env的大肠杆菌E.coli BL21(DE3),8 h后可获得分子量约为88 kD的以包涵体形式存在的囊膜蛋白。本试验测定了enJSRV全基因序列,成功构建了表达囊膜蛋白的pET32aEnv重组质粒,并表达纯化了囊膜蛋白,可为特异性抗体的制备奠定基础,并为囊膜蛋白生物学功能的深入探讨提供理论参考。