牛病毒性腹泻-黏膜病(Bovine viral diarrhea/mucosal disease, BVD/MD)是由牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus, BVDV)感染而引起的一种极为复杂、呈多种临床症状的重要传染病。该病以发热、咳嗽、黏膜糜烂、溃疡、白细胞减少、腹泻、免疫耐受与持续感染、免疫抑制、先天性缺陷、怀孕母牛流产、产死胎或畸形胎等为主要特征。该病呈世界性分布,在我国已有20多个省份报道发生。BVDV可感染各个年龄段的牛,持续性感染个体症状隐蔽,动物带毒率高,特别是BVDV严重影响感染动物的繁殖,成为牛场效益的隐形杀手,给全球畜牧业造成了巨大的经济损失。牛病毒性鼻气管炎(Infectious bovine rhinotracheitis, IBR)是由牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus, IBRV)也称牛疱疹病毒1型(BHV-Ⅰ)感染家养牛和野生牛引起的一种急性、热性、接触性传染病。临床上以高热、呼吸困难、鼻炎、鼻窦炎和上呼吸道炎症为主要特征,还能引起母牛流产和死胎、肠炎及小牛脑炎。目前我国大部分省市地区的各种牛群中均有此病毒感染,同时由于没有适当的免疫防护措施,该病呈上升趋势,对牛群肥育率、产奶量和繁殖影响极大,给养牛业造成了严重危害。目前在国内这两种病混合感染的趋势明显上升,是对我国的规模化养牛业的严峻挑战。然而我国在这两种病的诊断技术和治疗药物开发方面还很薄弱,因此,针对BVDV和IBRV诊断技术研究和新型疫苗的开发是当前重要任务,对这两种病的预防、控制具有重要的意义。E2蛋白是BVDV的主要糖蛋白,其N端伸出BVDV囊膜的外表面,是决定BVDV抗原性的主要部位,也参与抗BVDV抗体结合、介导免疫中和反应及与宿主细胞识别、吸附。IBRV编码11种糖蛋白,其中gD蛋白是IBRV的主要糖蛋白,是病毒粒子表面和病毒感染细胞的主要分子,是病毒吸附、侵入宿主细胞所必需的,能诱导宿主机体产生高水平的体液免疫与细胞免疫,且能引起更高而持久的细胞免疫,抗gD抗体中和病毒效果最好。以上表明E2和gD蛋白是研究BVDV和IBRV首选的特异性抗原。基于此,本实验首先运用PCR方法分别获得BVDV E2和IBRV gD基因;通过pEASY-T3克隆技术分别构建pEASY-E2和pEASY-gD重组载体；采用Two-step PCR方法获得融合基因E2-gD,并将其克隆入pET28a载体,构建pET28a-E2-gD重组载体；将PCR、酶切鉴定及测序鉴定正确的重组载体,转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,37℃,经1mM IPTG诱导蛋白表达,亲和层析纯化重组蛋白,BCA工作盒测定纯化蛋白浓度为2.69mg/ml;Western-blot结果显示其具有作为免疫原的特异性；免疫家兔制备抗血清,血清中和实验结果表明,中和抗体效价为44.7(IBRV)/22(BVDV)。研究结果表明,E2-gD蛋白免疫原性较好,可诱导产生较高效价的中和抗体,为研发BVDV/IBRV两种病毒的诊断抗原及联合亚单位疫苗奠定基础。