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研究目的乳腺叶状肿瘤（Phyllodes Tumor,PT）和纤维腺瘤（Fibroadenoma,FA）均属于纤维上皮性肿瘤,是一组具有异质性的双向分化的肿瘤。PT根据组织学特点分为良性、交界性及恶性,其中最常见的为良性叶状肿瘤（Benign Phyllodes Tumor,BPT）,约占所有叶状肿瘤的60%-75%。FA和BPT的临床表现较为相似,两者在临床资料方面的研究不少,但由于样本量不同等原因导致结果各有差异。收集FA和BPT的临床资料并加以分析对了解两种疾病有一定的临床意义。同时,BPT和FA在鉴别诊断在临床上较为困难,现有的诊断方法难以提供准确的鉴别诊断结果,因此寻找新的可靠的肿瘤标志物用于鉴别BPT和FA具有重要临床意义。良性PT,交界性PT和恶性PT是乳腺叶状肿瘤这一疾病的不同发展阶段。对于PT的治疗以手术为主,对于恶性PT而言,放疗以及化疗的作用尚不明确,同时对于其发生发展的机制也不清楚。本实验在BPT原代细胞以及同为间叶组织来源的HT1080细胞系中进行分子机制探索研究,对研究PT的发生发展有重要意义。材料方法本实验收集齐鲁医院2014-2020年的981例典型FA病例以及2009-2020年的156例BPT病例资料进行回顾性分析以了解两者在临床资料方面的异同。通过 miRNA-Seq 技术筛选出 BPT 与 FA 间的 DEmiRNA（Differential Expression microRNA）,并进一步在原代细胞与新鲜组织中通过qRT-PCR（Quantitative Real-time PCR）进行验证其表达的稳定性与差异性,从而寻找可用于充当FA与BPT的鉴别标志物的 miRNA。通过 Targetscan、miRDB、mirDIP、miRWalk 和miRTar2GO预测miRNA的下游靶点,并将结果取交集以推测相关性较强的下游靶基因。然后通过western blot、免疫组化与双荧光素酶报告实验验证miRNA与其下游靶点的相关性。通过转染技术使得HT1080细胞系中的miR-140-3p表达上调或抑制,观察miR-140-3p对HT1080细胞系的作用效果,从而推测miR-140-3p在PT,尤其是恶性PT中可能发挥的作用及机制。并进一步通过细胞计数,划痕实验,细胞周期检测,细胞凋亡检测等技术探索miR-140-3p发挥作用的通路及靶点,以加深对PT的研究与探索。实验结果在临床资料方面,相比于FA患者,BPT患者平均年长4.22岁,平均长径约长1.48 cm,肿块出现在双侧的概率以及肿块多发率更低,有生育史和哺乳史的患者比例更高;在病程,绝经情况和家族肿瘤史这几个方面,两组间并无显著区别。通过miRNA-Seq技术筛选出3种有统计学意义,倍数变化大于1.2且表达量高的 DEmiRNA,分别是 miR-140-3p、miR-126-5p 和 miR-10b-5p。经过 qRT-PCR在新鲜标本中进一步验证中发现miR-140-3p的表达差异在两组间有统计学意义,与FA组相比,BPT组的miR-140-3p表达水平下调了约70%。相同的差异趋势在原代细胞中也得到体现。生信网站预测并取交集得到46个miR-140-3p的下游靶基因。western blot实验结果显示BPT组新鲜标本中PD-L1和BCL2的含量较FA组高,但不具有统计学意义。免疫组化结果显示恶性PT石蜡标本中PD-L1和BCL2的表达量远高于良性PT,交界性PT和FA标本。在HT1080细胞系中,western blot实验结果显示miR-140-3p高表达组中PD-L1和BCL2的表达量下降,低表达组反之。划痕实验结果显示miR-140-3p高表达组的迁移能力低于低表达组。双荧光素酶报告实验结果显示miR-140-3p高表达时,WT质粒组的荧光强度较MUT质粒组显著下降,在PD-L1和BCL2质粒中出现了相同的趋势,且具有统计学意义。流式细胞学检测结果显示miR-140-3p高表达组与低表达组细胞的细胞周期并无明显区别,但miR-140-3p高表达组细胞中的凋亡比例明显高于低表达组。结论1.BPT更好发于年长及肥胖的人群中,BPT肿块较FA肿块更大,长径在5 cm以上的肿块多为BPT,同时,BPT出现多发和双侧同时发生的情况较FA更少。2.miR-140-3p在FA和BPT间表达差异显著,有作为两者间鉴别标志物的潜力。3.PD-L1 和 BCL2 是 miR-140-3p 的下游靶点。4.在HT1080细胞系中,高表达的miR-140-3p显著抑制了细胞的增长速度和迁移能力,促进了细胞凋亡,但对细胞周期没有显著影响。