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生物制品的效力易受温度影响,在储存及运输过程中需保持低温。而依托高成本的冷链运输一直是疫苗配送所面临的巨大问题,若无法将疫苗有效保存,可带来免疫失败等巨大经济损失。根据我国2001版《兽用生物制品质量标准》,冻干活毒疫苗在2-8℃有效保存期多为3-9个月。有限的保存期限制了疫苗的持续效力,同时也为我国无法提供良好保存条件的偏远地区带来诸多不便。生物制品的稳定保存主要依赖于保护剂的添加。目前我国传统冻干保护剂配方多为明胶、蔗糖、乳糖、脱脂乳等基础成分,但是它们大都存在配方简单,保护功能差等诸多问题。因此开发新型活病毒保护剂,对解决传统配方稳定性差,延长疫苗的持续效力具有重要意义。犬瘟热（Canine distemper,CD）是由犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV）引起的一种高度接触性动物传染病,病死率高达80%以上,是当前威胁宠物健康,毛皮经济动物饲养及野生动物保护业的重要疫病之一。目前主要通过疫苗接种预防CD,其中CD疫苗使用的Ondersteport株多为Vero细胞适应株,是较为成熟的标准弱毒疫苗株,是目前常见的商品化疫苗所用毒株,其体外培养存在滴度低且无眼观细胞病变等问题。同时CDV为单股负链RNA病毒,对温度及外界环境十分敏感,不易长期有效保存。基于以上问题,研发一种耐热冻干保护剂为CDV疫苗的稳定保存提供物质基础具有重要意义。第一部分:犬瘟热病毒（Ondersteport株）培养条件优化首先比较不同接毒量对CDV滴度的影响,设置感染复数（Multiplicity of infection,MOI）为0.5,0.1,0.01和1%,2%的接毒量接种Vero细胞后检测病毒滴度;选取1%,2%接毒量接种Vero细胞,绘制1至5d的生长动力学曲线;分别比较冻融及超声波破碎两种收毒方法,对CDV滴度的影响;利用各组实验的最佳条件建立基础种子批毒。结果表明,2%接毒量所收获病毒液滴度最高可达106.38 TCID50/mL。病毒生长曲线表明,接毒后第4天CDV滴度达到最高点为106.681.681 TCID50/mL。传统冻融收毒方法优于超声波破碎方法,其滴度高达107.38 TCID50/mL。扩大培养所建三批基础种子毒,无菌检验及支原体检测合格,为后续耐热冻干保护剂的筛选及优化提供物质基础。第二部分:犬瘟热弱毒疫苗耐热冻干保护剂的筛选及进一步优化基于各类成分的保护机制,根据耐热冻干保护剂的基本构成原则,分别设计A1、B2、C3、D4四种配方;利用耐老化实验37℃保存7d,筛选出最优基础配方;利用Plackett-Burman试验（简称PB试验）确定最优基础配方中各成分含量影响病毒存活率的显著性;建立回归分析,利用软件Minitab 18确定最大响应值下各成分的最优组合并进行冻干验证。结果表明,经耐老化实验后,C3配方病毒存活率最高可达72.82%;PB试验（N=12）模型不显著,最大响应值为97.12%;病毒经最优配方冻干后滴度可达106.335 TCID50/mL。综上所述,本研究成功筛选出一种适用于CDV（Ondersteport株）的耐热冻干保护剂,可为今后CDV疫苗的研发及保存提供参考。