旋毛虫与肝癌H7402相关抗原蛋白的单克隆抗体制备及应用

来源 :吉林大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:socks2010
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旋毛虫(Trichinella speralis)是一种毛形科毛形属寄生虫,对人畜皆有感染能力。根据现有的研究资料表明,旋毛虫对部分肿瘤细胞具有一定的抑制和干扰作用,能够降低肿瘤细胞的增殖能力或诱导肿瘤细胞的凋亡。肝癌被认定为世界健康一大杀手,发病率及死亡率居高不下,其危险性不容小觑。但是,肝癌疫苗及传统抗肝癌药物并不能良好的发挥作用,因此,探寻高效、低毒、副作用少的生物制剂成为人们对抗肝癌的迫切需求。现已有研究证明旋毛虫虫体蛋白与肝癌H7402细胞间存在交叉抗原;本实验室利用免疫筛选得到的旋毛虫与肝癌H7402相关的CK-1基因制备了单克隆抗体,其在体内和体外实验中均发现能够抑制肝癌H7402细胞的生长。由此可见,旋毛虫体内可能含有或分泌抗癌物质。故而,本实验拟通过表达文库筛选法寻找其他旋毛虫与肝癌H7402细胞之间的相关抗原,并利用制备的单克隆抗体来观测其抑制肿瘤细胞生长的效果,从而为日后探索肝癌的生物治疗方法和旋毛虫抑制肿瘤的效果提供信息。本实验在已建立的旋毛虫cDNA表达文库的基础上,利用免疫筛选的方法获得了与肝癌H7402细胞具有免疫反应的6种相关抗原基因,分别为半胱氨酸线性蛋白(Tsp06120)、高尔基体联合植物相关致病蛋白(Tsp07885)、硒蛋白T(Tsp03801)、DNA剪切修复蛋白ERCC-1(Tsp01641)、脱氧核苷酸转移酶作用蛋白(Tsp01476)和核糖氧化还原蛋白(Tsp04425)。通过生物学分析后,后续试验选择硒蛋白T基因进行原核表达和纯化。在硒蛋白T单克隆抗体的制备中,我们共得到3株单克隆细胞记为4F1,4H2和4D4。经抗体亚类鉴定、核型分析和效价检测后,4H2为IgG2b亚类,染色体数目104,腹水效价,大于1×105。随后,用4H2抗体进行了体内和体外的肿瘤抑制实验。结果发现,在体外MTT实验中,当单克隆抗体含量为50μg/100μL时,对肝癌H7402细胞的生长抑制率为26.7%;在动物模型实验中,当单克隆抗体含量为100μg/100μL时,对肿瘤的抑制率为80.3%。
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