虫生真菌作为重要的天敌生物资源，具有广阔的应用前景，尤其是其可贵的流行潜力始终吸引着人们，同时虫生真菌还是害虫的自然控制因子和重要的生物防治材料。　　 粉棒束孢(Isaria farinosa)是一类较常见的世界性分布的虫生真菌，其寄主广泛，由于粉棒束孢适宜于低温下的生长发育和侵染致病，因此较白僵菌和绿僵菌而言，对害虫越冬种群的防治有着独特的优势。然而它也有着虫生真菌的通病，如对环境温、湿度要求高、耐储藏性差、适应环境能力弱、致死慢和防效不稳定，因此这也严重影响了它的广泛应用和商品化生产。　　 根据黄勃等RACE法得到的cDNA序列（pr1H），运用PCR技术与DNA步移技术，从粉棒束孢中克隆出类枯草杆菌蛋白酶的结构基因及其上游序列（命名为：IfPrU，GenBank登录号：GQ505371）。结构基因总长1650bp，扩出的结构基因DNA与其cDNA比较在距离起始密码子369bp处有一个内含子，大小为51bp。通过DNA步移技术得到的上游序列大小为3189bp，与cDNA相互重叠的部分为352bp。分析表明该基因转录起始位点位于2838bp的A碱基处，上游序列中没有明显的TATA-盒和CAAT-盒，但含有GC-box、热激转录因子(HSF)等重要的转录因子结合位点，以及GATA等启动子顺式调控元件。　　 通过SMART RACE RT-PCR技术从粉棒束孢中克隆出另外一个蛋白酶基因的cDNA序列（命名为：Ifpr1，GenBank登录号为：JN014832），并通过DNA步移技术获得了它的上游启动子序列（命名为：Ifpr1-up，GenBank登录号：JN014833）。　　 序列分析表明：该基因cDNA全长1288bp，5’端非翻译区84bp，3’端非翻译区244bp，开放阅读框（ORF）960bp，编码319个氨基酸。成熟蛋白理论分子量为33.2kDa，理论等电点为7.39，Ifpr1蛋白酶信号肽由20个氨基酸组成。得到的上游序列长度1790bp中有309bp序列与cDNA序列重叠。分析表明，该上游序列的转录起始位点位于第1482位A碱基处，没有明显的TATA-box和CAAT-box，但含有GC-box转录因子结合位点，以及热激应答元件HSF和GATA元件等启动子顺式调控元件。　　 通过Realtime-PCR技术，对粉棒束孢pr1H和Ifpr1在蝉蜕诱导培养的条件下进行比较研究，从mRNA转录水平探讨这两个基因在不同诱导时间段（12h-60h）的表达情况。结果表明，在经过蝉蜕诱导后它们的表达量都大大提高，其中Ifpr1诱导后的表达最为明显，是诱导前的2.97×105倍。因此，推测这两种蛋白酶属于诱导性酶，且Ifpr1可能是该粉棒束孢菌株蛋白酶类的主效基因，在菌株侵染过程中起主要作用。　　 将克隆得到的粉棒束孢Ifpr1基因连接到分泌性表达载体pPIC9K上后，通过电转化，转入毕赤酵母GS115。经甲醇诱导获得了约50KDa左右的表达蛋白，大于其理论预测值，这可能是由于巴斯德毕赤酵母对表达蛋白进行糖基化修饰的结果。同时，酶活测定结果表明，表达蛋白具有蛋白酶生物活性，诱导的粗酶液酶活最高达到26.9U/ml。蛋白酶