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第一部分目的探讨肝细胞粘附分子(hepatocyte cell adhesion molecule, hepaCAM)在肾癌中的表达及临床意义。方法:采用逆转录PCR(RT-PCR)方法检测6例正常肾组织和30对肾癌及相应的癌旁组织中hepaCAM mRNA表达,分析其与肾脏病理学特征的关系。结果hepaCAM mRNA在6例正常肾组织均呈现高表达;而在30例癌组织中hepaCAM的表达显著低于癌旁组织(P<0.01),且其表达和肾癌分级、分期无显著相关性(P>0.05)。结论hepaCAM基因在正常肾脏组织中高表达,在肾癌组织中呈低表达(或不表达),且不能用于评价肾癌的分级分期。第二部分目的:hepaCAM基因真核表达载体pEGFPN2/hepaCAM及空载体pEGFPN2的鉴定,观察转染后hepaCAM在786-0细胞中定位,获得稳定表达hepaCAM的786-0细胞株。方法:将携有hepaCAM基因的重组真核表达载体pEGFPN2/hepaCAM经BamHI/HindIII双酶切及序列鉴定,转染786-0细胞株,荧光显微镜计算脂质体转染细胞效率并观察hepaCAM蛋白786-0细胞的定位。G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞,RT-PCR检测mRNA表达水平。结果:获得含有hepaCAM基因的真核表达载体,建立稳定、高效转染786-0细胞的方法。重组质粒转染786-0细胞的最佳转染时间为48h,最合适质粒与脂质体的比例为1:2。荧光显微镜显示:hepaCAM主要定位于细胞质和细胞核周区域及突起表面,呈现典型细胞粘附分子特性。筛选出稳定表达hepaCAM的786-0细胞,检测到高表达的hepaCAM基因。结论:重组质粒能够有效稳定转染786-0细胞株,为进一步研究hepaCAM在RCC细胞中侵袭活性奠定了基础。第三部分目的:探讨hepaCAM基因导入对肾癌细胞侵袭活性的影响。方法:MTT法及软琼脂克隆形成实验观察其对肾癌细胞生长抑制作用;RT-PCR方法检测MMP2和MMP9mRNA的表达,明胶酶谱法检测MMP2和MMP9活性的变化,Transwell小室法检测786-0细胞的体外侵袭能力。结果:MTT显示hepaCAM基因抑制细胞成活率在4、5、6天分别为26.5%、38.1%、35.7%(P<0.01);克隆形成实验显示当hepaCAM基因转染786-0细胞后,细胞克隆数减少5倍; MMP2及MMP9 mRNA表达和酶活性明显受抑制(P<0.05);hepaCAM基因的导入显著减弱了肾癌细胞跨膜侵袭能力(P<0.01)。结论:hepaCAM基因稳定转染到786-0细胞可能通过下调MMP2及MMP9的表达、抑制明胶酶的活性、抑制细胞生长进而抑制肾癌细胞786-0侵袭力。因此,候选抑癌基因hepaCAM可能为肾癌生物学治疗提供新的分子靶点。