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目的多发性骨髓瘤(MM)是浆细胞克隆性增生的恶性肿瘤,是一种低增殖性、低凋亡活性的分子克隆疾病。侵袭和转移是恶性肿瘤的重要特征。而肿瘤细胞的迁移是其侵袭转移的基础。细胞迁移(cell migration)指的是细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的浓度梯度后而产生的移动。在此过程中细胞不断重复着向前方伸出突足,然后牵拉胞体向前移动。细胞骨架和其结合蛋白是这一过程的物质基础,另外还有多种物质对之进行精密调节。HSP90为生物进化过程中一种高度保守的胞浆蛋白质。HSP90被抑制后可以抑制肿瘤细胞的血管生成和移动；并且能抑制HGF/SFMET信号通路,使细胞的运动能力和侵袭能力减弱。已有研究证明,HSP90抑制剂可以诱导MM细胞的调亡。HSP90有HSP90α和HSP90β两种类型。HSP90α可通过调节细胞周期促进细胞增殖,HSP90β能够抑制细胞凋亡与分化。硼替佐米是治疗复发或难治的MM的最有前途的新药。其诱导的细胞凋亡与很多事件有关,其中之一是激活经典的应激反应蛋白如热休克蛋白HSP27、HSP70、HSP90。众多资料表明,在恶性肿瘤细胞中HSP90过度表达,并且以HSP90α的表达增高为主。本实验以人多发性骨髓瘤细胞株U266细胞为研究对象,探讨了经硼替佐米作用后的MM细胞中热休克蛋白HSP90的表达情况,并通过Transwell小室趋化装置观测了药物作用后的细胞迁移能力的变化,分析了HSP90与人多发性骨髓瘤细胞株U266细胞迁移能力的相关性。从而为进一步开发新药及指导临床治疗提供理论基础。方法1.细胞培养冻存的MM细胞经过复苏后,置于含1 0%的胎牛血清的RPMI 1640培养液中,于37℃、5%CO2和95%空气湿度条件下进行培养,在细胞生长至对数生长期时收集备用。2.侵袭实验侵袭实验用24孔趋化板,其孔径为8μm。U266细胞在含10%的胎牛血清的RPMI 1640培养液中孵育,上室加U266细胞,下室分别加入含有0,50,100,150,200 nmol／L浓度硼替佐米的培养液,置培养箱37℃,孵育4h后收集下室悬液中的细胞,用细胞记数板在倒置显微镜下进行细胞记数。3.RT-PCR分别检测经硼替佐米作用和不经其作用前后,体外MM细胞中HSP90α和HSP90β的表达水平。4.统计学处理数据均用SPSS 13.0统计软件包处理,计量资料统计描述用戈±s表示；多组资料之间的比较采用单因素方差分析；组间两两比较采用SNK法；HSP90α和HSP90β的表达与人多发性骨髓瘤细胞迁移能力的关系采用相关分析。所有分析结果均以P<0.05为有统计学意义。结果通过上述研究方法,我们发现1.人多发性骨髓瘤细胞株中HSP90mRNA的表达情况随着硼替佐米浓度的增加,其MM细胞中HSP90α的mRNA表达量逐渐增加。由低浓度组到高浓度组所对应的HSP90α的灰度值分别为0.343±0.017、0.505±0.039、0.640±0.029、0.760±0.059、0.963±0.054；两两组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。而HSP90β的灰度值Onmol/L (0.610±0.022)组与50、150、200nmol/L组之间有差别(P<0.05)。50(0.765±0.050)、100nmol/L(0.645±0.052)浓度组对应的HSP90β的灰度值不同(P<0.05)。100nmol/L组与150(0.770±0.059)、200nmol/L(0.790±0.027)组对应的HSP90β的灰度值有差别(P<0.05)。虽然从图上看HSP90β的mRNA表达量增加趋势不很明显,但总体上仍具有统计学意义(P<0.05)。2.硼替佐米对人多发性骨髓瘤细胞迁移能力的影响U266细胞在趋化因子的作用下由上室迁移至下室,但因为下室中硼替佐米的药物浓度不同,因此最终进入下室的细胞数不同。随着药物浓度的增加,进入下室的U266细胞数分别为98.25±9.639、87.75±17.154、73.50±7.594、70.25±19.973、52.75±8.500。经SNK法对各个不同浓度组所对应的细胞迁移数进行两两比较,得出下述结果,0nmol／L组与100、150、200nmol/L有差异(P<0.05)；50nmol/L组与200nmol/L有差异(P<0.05)。故随着硼替佐米药物浓度的增加,其U266细胞迁移数逐渐减少(P<0.05)。3.HSP90 a和HSP90β表达与人多发性骨髓瘤细胞迁移能力的相关性分析。随着硼替佐米药物浓度的逐渐增加其细胞迁移能力呈下降趋势,但其细胞内的HSP90的表达呈逐渐上调趋势,并且以HSP90α的增高为主。经Pearson相关分析得知,HSP90的表达与人多发性骨髓瘤细胞迁移能力呈负相关(HSP90α的r值为-0.818,P<0.05；HSP90β的r值为-0.591,P<0.05)。结论1.随着硼替佐米药物浓度的增加,人多发性骨髓瘤细胞中HSP90α的mRNA表达量逐渐增加。而HSP90β的mRNA表达量虽然总体上有差别的,但其增加趋势与HSP90α相比,不很明显。2.随着硼替佐米药物浓度的增加,人多发性骨髓瘤细胞迁移能力逐渐减弱。3.HSP90表达与人多发性骨髓瘤细胞迁移能力存在相关性。