中药和血清中马兜铃酸分离分析方法及其类似物代谢机制研究

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本论文采用高效液相色谱法研究了药材中四种马兜铃酸AAⅠ,AAⅡ,AAⅢa,AAⅣa的提取和含量测定方法。药材经甲醇/水提取,取上清液,采用高效液相色谱分析。以奈普生为内标物,采用内标法进行定量。结果表明,在1~100μg/mL范围内呈良好的线性关系,四种马兜铃酸中的相关系数(r2)均大于0.999。4种马兜铃酸的日内相对标准偏差(RSD)小于4.04%,日间RSD(n=5)小于5.41%。在马兜铃药材中添加马兜铃酸对照品,马兜铃酸的回收率在58.3~120.6%之间,相对标准偏差为0.16~6.78%。   采用季铵型的混合阴离子交换固相萃取材料,研究了血清中四种马兜铃酸的选择性富集方法,并利用高效液相色谱-串联质谱法定量检测。四种马兜铃酸在所研究的浓度范围的线性关系良好,AAⅠ、AAⅡ、AAⅢa、AAⅣVa的检测限(S/N=3)分别为0.003、0.015、0.0003和0.002μg/mL,定量限为0.01、0.04、0.001、0.005μg/mL。血清样品加样回收率在60.1~84.0%之间,日内RSD均小于1.1%,日间RSD均小于1.5%。研究表明,所采用的固相萃取柱对血清中的马兜铃酸具有较好的富集作用,方法具有回收率高,线性范围宽,重复性好等特点。   探索性地研究了经SD大鼠暴露苯并[a]芘后血清白蛋白与苯并[a]芘及其代谢物的情况,以期为马兜铃酸在体内的代谢研究提供参考。建立了血清中苯并[a]芘代谢产物反式二氢二醇环氧苯并芘高效液相色谱法测定含量的方法。利用MALDI-TOF-MS质谱仪定性分析了大鼠血清白蛋白结合位点情况,初步发现了白蛋白加合物位点信息。
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