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肝癌是常见的消化系统肿瘤,死亡率仅次于胃癌、食道癌,占全世界癌症死亡的第三位。肝癌占我国癌症死因的第二位,我国每年约11万人死于肝癌,占全世界肝癌死亡人数的45%。肝癌晚期患者因癌细胞扩散而治愈率较低,手术切除后肝癌的转移复发率高达75%。肝癌细胞的侵袭和转移可能是肝癌治疗失败和患者致死的主要原因,而肿瘤转移是一个多步骤的复杂的生物学过程,所以研究肝癌细胞的转移机制对肝癌细胞的防治非常重要。目的：本实验主要探讨Toll样受体(TLR)4信号活化后对肝癌细胞系HepG2、SMMC7721、Hep3B的体外侵袭活性的影响。同时检测TLR4信号转导通路中多个信号分子的活化状态或磷酸化水平,并加入相关分子抑制剂,以明确该信号转导分子在TLR4促进肿瘤细胞侵袭中的作用。旨在阐明肝癌细胞内TLR4信号活化与肝癌细胞侵袭活性间的相关性,为今后肝癌防治提供了潜在的作用靶点。方法：利用荧光定量PCR检测TLR4、MMP2、MMP9在HepG2、SMMC7721.Hep3B细胞中mRNA的表达情况。在1μg/ml LPS刺激不同时间后,用荧光定量PCR方法检测TLR4、MMP2、MMP9 mRNA水平的变化,同时用流式细胞仪(FACS)检测TLR4蛋白水平的变化。用蛋白印迹法(western blot)检测LPS刺激后JNK、IκBα和pNF-κB的磷酸化水平变化以及NF-κB核转位的变化。用划痕实验检测这几种细胞的侵袭活性,并用transwell方法检测LPS刺激后细胞体外侵袭活性的改变。观察JNK抑制剂SP600125能否抑制细胞的体外侵袭活性以及下游信号转导分子的活化。结果：1. HepG2、SMMC7721、Hep3B细胞均表达一定水平的TLR4、MMP (Matrix metalloproteinase, MMP) 2以及MMP9。2.LPS刺激后HepG2、SMMC7721、Hep3B细胞的TLR4mRNA和蛋白水平均升高,同时MMP (Matrix metalloproteinase, MMP) 2、MMP9的mRNA水平亦增加。3.LPS刺激可以促进肝癌细胞系HepG2、SMMC7721、Hep3B侵袭活性增加。4.LPS刺激后信号分子JNK,IκB以及NF-κB的磷酸化程度增高,转录因子NF-κB的核转位增加,而p-ERK, p-p38水平无明显变化。5.加入JNK抑制剂SP600125后,肝癌细胞系HepG2、SMMC7721、Hep3B的侵袭能力降低。6.JNK抑制剂SP600125能抑制LPS诱导的JNK和IKB磷酸化水平的增高。结论：TLR4的活化可以促进肝癌细胞的侵袭活性。