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目的:细胞衰老(senescence)是在应激状态下细胞持续性不可逆地增殖抑制。衰老细胞可以抵抗凋亡长期存活。当衰老的细胞不能被免疫细胞有效清除时,随着时间延长在组织内累积,并分泌过多的多种细胞因子使组织微环境发生改变,对机体衰老和衰老相关疾病有促进作用。特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)发病率逐年升高,缺乏有效的治疗手段,患者预后差。临床观察和动物实验研究发现Ⅱ型肺泡上皮细胞衰老可能与肺纤维化的发生有关。前期通过加权基因共表达网络方法分析基因芯片结果提示肌动蛋白微丝相关蛋白1(ActinFilament Associated Protein 1,AFAP1)在放射性肺纤维化小鼠肺组织中表达下调可能对衰老表型具有关键作用。A549细胞是人肺腺癌上皮细胞系具有II型肺泡上皮细胞特性,可被博来霉素诱导衰老。因此,本文拟通过博来霉素诱导的A549细胞衰老模型和肺纤维化小鼠模型探讨AFAP1在II型肺泡上皮细胞衰老中的作用及分子机制。方法:用50ug/ml的博来霉素处理A549细胞5天,建立细胞衰老模型。用相同浓度的博来霉素处理细胞1-5天观察细胞从周期阻滞到衰老的整个过程,SA-β-Gal染色检测衰老细胞数目,统计衰老细胞面积。用Western blot和免疫荧光的方法检测AFAP1、p21、c-Src等蛋白表达水平。过表达AFAP1后观察细胞衰老状态及各蛋白表达水平变化,利用免疫共沉淀观察AFAPI和c-Src在不同处理下的结合状态。通过ELISA和qRT-PCR分别检测几种细胞因子在蛋白水平和mRNA水平的表达情况,并用MTT法检测衰老细胞活力。将C57BL/6J小鼠分为对照组和博来霉素处理组,博来霉素处理组给药剂量为0.04 mg/100 ul/只,2次/周,连续给药8次,通过肺脏器指数,肺组织胶原沉积,肺脏羟脯氨酸含量,肺组织病理评分等指标变化判定造模效果。利用免疫共沉淀观察AFAP1和c-Src在不同处理下的结合状态。结果:50 ug/ml的博来霉素处理A549细胞5天后可以建立细胞衰老模型,表现SA-β-Gal阳性细胞数升高且细胞体积显著增大;p21表达水平升高。衰老A549细胞中AFAP1表达水平下降。不同时间检测细胞内AFAP1水平,发现从BLM处理后出现升高第4天开始明显下降在第5天最低,在衰老的A549细胞中激活型c-Src(SrcpY416)与AFAP1表达水平变化一致,但c-Src和活性抑制状态的c-Src(SrcpY527)表达水平不变。细胞过表达AFAP1后再用博来霉素诱导,SA-β-Gal阳性细胞数及细胞体积与空载对照比较未发现有明显差异,Src pY416和p21也未见明显改变。但是,过表达AFAP1可以降低TGFβ、TNFα和IL-6的分泌,并增强博来霉素诱导的A549衰老细胞的活力。通过转染AFAP1过表达质粒后,正常状态下AFAP1和Src pY416没有结合,但衰老状态下两个蛋白结合能力增加。利用博来霉素诱导肺纤维化小鼠模型中,AFAP1表达下调且与Src pY416结合能力比对照组增强。结论:衰老的A549细胞和小鼠肺组织细胞中AFAP1表达下调,c-Src活性降低;过表达AFAP1不能改变博来霉素诱导的A549细胞衰老的形态,但可增强衰老细胞的活力并减少衰老细胞中细胞因子的分泌,提示通过影响AFAP1和c-Src相互作用可能会降低细胞衰老相关表型,改善组织微环境。有关AFAP1和c-Src相互作用关系对细胞衰老发生发展的影响和机制需要进一步研究。