论文部分内容阅读
目的:探究针刺百会透曲鬓穴对脑出血大鼠自噬及mTOR信号通路的影响方法:将126只健康清洁级雄性Sprague-Dawley大鼠（300±10g）随机分成7组,假手术组（Sham组）、脑出血模型组（模型组）、模型+针刺组（针刺组）、3-MA组、3-MA+针刺组、雷帕霉素组、雷帕霉素+针刺组。每组按时间点（1d、3d、7d）分3个亚组,每个亚组6只。根据大鼠立体定位图谱,将50μL自体血注入到大鼠尾状核制备脑出血模型,分别给予针刺患侧百会透曲鬓穴、3-MA（侧脑室注射）、雷帕霉素（侧脑室注射）进行干预,于各时间点对大鼠进行神经功能缺损评分（复合神经功能评分、前肢放置测试、悬线测试、平衡行走测试）,并于评分结束后取材检测自噬相关蛋白LC3A/B、p62和mTOR信号相关蛋白p-mTOR、p-S6K1的表达含量变化。结果:1.针刺百会透曲鬓穴能够减轻大鼠脑出血后神经功能缺损体征（vs.模型组,p<0.01）;3-MA组能够加重大鼠神经功能缺损体征（vs.模型组,p<0.01）,而3-MA+针刺组无明显改善大鼠神经功能缺损（vs.模型组,p>0.01）;雷帕霉素组和雷帕霉素+针刺组可以改善脑出血大鼠神经功能评分（vs.模型组,p<0.01）。2.各组脑出血大鼠脑组织LC3A/B蛋白免疫组化染色及免疫印迹结果表明,在1、3、7天大鼠脑出血半暗带区脑组织细胞质内LC3 A/B蛋白表达为阳性,有明显的LC3A/B蛋白表达上升（vs.假手术组,p<0.05）。于模型组比较,针刺组能在3、7天上调LC3A/B蛋白表达（p<0.05）,差异具有统计学意义。自噬抑制剂3-MA组能明显下调LC3 A/B蛋白含量表达,同时针刺干预能在3、7天上调蛋白的表达（p<0.05）,差异具有统计学意义。而自噬激动剂雷帕霉素组在各个时间点均能上调LC3A/B蛋白含量,同时介入针刺干预能在3、7天稍下调LC3A/B蛋白含量（p<0.05）,差异具有统计学意义。3.各组脑出血大鼠脑组织p62蛋白免疫印迹结果表明,模型组大鼠在1、3、7天有明显的p62蛋白表达明显上升（vs.假手术组,p<0.05）。与模型组比较,针刺组均能下调p62相对蛋白表达（p<0.05）,差异具有统计学意义。自噬抑制剂3-MA组能明显提高p62蛋白含量表达,同时针刺干预能在1、3天下调p62蛋白的表达（p<0.05）,差异具有统计学意义。而自噬激动剂雷帕霉素组在各个时间点均能下调p62蛋白含量,同时介入针刺干预能在1、3天明显上调p62蛋白含量（p<0.05）,差异具有统计学意义。4.各组大鼠脑组织p-mTOR、p-S6K1蛋白免疫印迹结果表明,模型组大鼠在1、3、7天有明显的p-mTOR、p-S6K1蛋白表达明显上升（vs.假手术组,p<0.05）。与模型组比较,针刺组均能下调p-mTOR、p-S6K1相对蛋白表达（p<0.05）,差异具有统计学意义。雷帕霉素组在各个时间点均能下调p-mTOR、p-S6K1蛋白含量,同时介入针刺干预能能上调p-mTOR、p-S6K1蛋白表达,差异具有统计学意义。结论:1.针刺百会透曲鬓穴可以改善脑出血大鼠神经功能缺损体征;2.针刺百会透曲鬓穴可以适度激活大鼠脑出血后自噬水平;3.针刺百会透曲鬓穴抑制mTOR信号通路中p-mTOR、p-S6K1蛋白含量的表达;4.针刺百会透曲鬓穴可能通过调控mTOR信号通路促进脑出血后自噬水平,进而改善大鼠脑出血后神经功能缺损体征。