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[目的]动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是心脑血管疾病的主要病理基础,尿毒症毒素硫酸吲哚酚(indoxyl sulfate,IS)是AS的重要危险因素,其发生机制仍未完全阐明。miR-34a-5p通路可多靶点作用于AS相关信号通路和分子。我们推测miR-34a-5p通路可能与IS促AS发生发展密切相关。为验证上述假设,我们拟采用分子生物学实验技术,对miR-34a-5p通路在IS促AS中的作用进行研究。[方法]1.运用MTT比色法检测IS对HUVECs、HA-VSMCs细胞活力的影响,筛选IS作用浓度和时间;2.IS干预HUVECs、HA-VSMCs,运用RT-qPCR检测细胞miR-34a-5p表达情况;3.先用miR-34a-5p抑制剂(inhibitors)和模拟物(mimics)质粒瞬时转染HUVECs、HA-VSMCs,以获得低表达和高表达miR-34a-5p的细胞,转染24小时后用IS处理细胞,IS浓度1000μM、干预36小时,运用CCK-8法和EdU法检测细胞增殖情况,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移情况,流式细胞术和Hoechst 33342/PI双染细胞检测细胞凋亡情况,Western blot检测miR-34a-5p通路相关分子蛋白Notch-1、Wnt-1、Jag1、E2F1、Sirt1、p53的表达情况。[结果]1.MTT结果显示,IS能够抑制HUVECs、HA-VSMCs细胞活力(p<0.05),且对细胞活力的抑制作用呈浓度、时间依赖性;IS浓度为1000μM、干预36小时,细胞活力开始下降显著(p<0.05)。2.RT-qPCR结果显示,IS处理后HUVECs、HA-VSMCs的miR-34a-5p表达与对照组相比均升高,分别为2.82、3.79倍(p<0.05);HUVECs和HA-VSMCs高、低表达miR-34a-5p后给予IS处理,发现高表达组与IS组miR-34a-5p相比分别为133.76、58.73倍(p<0.05),低表达组与IS组miR-34a-5p相比分别为0.71、0.73倍(p<0.05)。3.细胞增殖、迁移、凋亡实验结果显示,IS干预HUVECs和HA-VSMCs后细胞活力、迁移率下降,细胞凋亡率增加(p<0.05);先用miR-34a-5p inhibitors和mimics转染HUVECs、HA-VSMCs以获得低表达和高表达miR-34a-5p细胞后,再用IS干预细胞,结果显示HUVECs、HA-VSMCs的mimics+IS组细胞活力、迁移率与mimics组相比较均下降(p<0.05),细胞凋亡率均增加(p<0.05),而inhibitors+IS组细胞活力、迁移率与IS组相比较均上升(p<0.05),细胞凋亡率均减少(p<0.05)。4.Western blot结果显示,IS干预HUVECs和HA-VSMCs后蛋白Notch-1、Wnt-1、Jag1、E2F1、Sirt1表达减少,蛋白p53表达增加(p<0.05);先用miR-34a-5p inhibitors和mimics转染HUVECs、HA-VSMCs以获得低表达和高表达miR-34a-5p细胞后,再用IS干预细胞,结果显示HUVECs、HA-VSMCs的mimics+IS组蛋白Notch-1、Wnt-1、Jag1、E2F1、Sirt1表达与mimics组相比均减少,蛋白p53表达均增加(p<0.05),inhibitors+IS组蛋白Notch-1、Wnt-1、Jag1、E2F1、Sirt1蛋白表达与inhibitors组相比均减少,蛋白p53表达均增加(p<0.05)。[结论]1.IS能够抑制HUVECs、HA-VSMCs增殖、迁移及促进细胞凋亡;2.miR-34a-5p参与IS抑制HUVECs、HA-VSMCs增殖、迁移及促进细胞凋亡。