论文部分内容阅读
目的:KBN(抗白色念珠菌,简称抗白念)触变凝胶剂处方为治疗VVC(外阴阴道念珠菌病,VuLvovaginaL Candidiasis,VVC)的临床经验方,该制剂由黄连、三白草、大青叶、鸡冠花、丁香、冰片等药材提取物与辅料艾维素制成,是本课题组持续研究的抗真菌中药新制剂,具有载药量大、抑菌效果佳等比较优势。该制剂的组方药味均被国家药监局公布的《己使用化妆品原料名称目录》收载,因此可便利地向护理液、沐浴露、洗手液等抗菌消炎健康日化产品延伸。茶树油为优良的天然抗菌剂,具有广谱抗菌、抗病毒、抗炎、抗肿瘤、抗氧化、消炎止痛、止咳化痰、杀螨虫及调节免疫力等药理活性。鉴于茶树油较强的药理活性,其被广泛应用于预防治疗等生活领域。本文探讨KBN触变凝胶剂与茶树油是否具有协同抗菌作用,以期后续为真菌、细菌易感人群,开发妆字号、消字号等日化健康产品提供药效研究基础。方法:1.茶树油与KBN触变凝胶剂体外联合抗白色念珠菌的配伍比例优选。分别采用琼脂稀释法、微量稀释法测定茶树油与KBN制剂体外联合抗白色念珠菌的最低抑菌浓度(Minimal Inhibitory Concentration,MIC)、最低杀菌浓度(Minimum Bactericidal Concentration,MBC),评价两药的联合抗菌(抑菌、杀菌)药效,并优选两者最佳抗菌配伍比例。2.含不同茶树油的KBN制剂体外抗白色念珠菌的作用。分别采用琼脂稀释法、微量稀释法测定含不同茶树油的KBN制剂体外抗白色念珠菌的MIC、MBC,考察KBN制剂中的茶树油含量对其体外抗菌作用的影响,亦期望进一步验证两者的最佳协同抗菌配伍比例。3.2.91%茶树油—KBN制剂体外动态抗白色念珠菌作用的研究。根据茶树油与KBN制剂体外协同杀菌的最佳配伍比例,采用菌落计数法考察2.91%茶树油—KBN制剂的体外动态抗真菌活性,以期获得药物浓度—时间—杀菌率的三者关系。4.5.66%茶树油—KBN制剂体外广谱抗菌效应探讨。根据茶树油与KBN制剂体外协同抑菌的最佳配伍比例,分别采用琼脂稀释法、微量稀释法测定及比较5.66%茶树油—KBN触变凝胶剂及其两药单用时体外抗7种试验菌的MIC、MBC。5.茶树油与KBN触变凝胶剂体外抗白色念珠菌作用机制的电镜研究。白色念珠菌分别经茶树油、KBN制剂、2.91%茶树油—KBN制剂、香莲外洗液2倍MBC药物浓度处理后,分别在透射电镜下观察各药物对白色念珠菌的超微结构影响,初步探讨其抗菌作用机理。结果:1.单用时,茶树油与KBN制剂的MIC分别为1.91mg/mL、13.03mg/mL,MBC分别为7.641mg/mL、104.25mg/mL;最佳协同抑菌(茶树油与KBN制剂质量比为6:100)、杀菌(茶树油与KBN制剂质量比为3:100)配伍比例时,FIC(联合抑菌分数,Fractional Inhibitory Concentration,FIC)、FBC(联合杀菌分数)分别为 0.5、0.25,茶树油与 KBN 制剂的 MIC 分别为 0.48mg/mL、3.26mg/mL,MBC 分别为 0.96mg/mL、13.03mmg/mL;香莲外洗液 MIC、MBC 分别为 31.25mg/mL、62.50mg/mL。2.含0.10%～9.09%茶树油的KBN触变凝胶剂,其MIC和MBC范围分别为1.63～13.03mg/mL、3.26～52.13mg/mL。同时2.91%茶树油—KBN制剂的杀菌效果、5.66%茶树油—KBN制剂的抑菌效果分别与前期两药最佳抗菌配伍比例的杀菌、抑菌效果—致。3.2.91%茶树油—KBN制剂浓度为52mg/mL,其3min杀菌效果优于单独用药组及香莲外洗液;5min除KBN制剂单用组外,各药物组杀菌效果相当;6h以上,各药物组具有完全杀菌作用。而3%茶树油—KBN制剂浓度为26mg/mL,其3min、5mmin杀菌效果与茶树油单用组相当,且优于香莲外洗液;6h、8h以上,各药物组杀菌作用近似。4.茶树油、KBN制剂、5.66%茶树油—KBN制剂、香莲外洗液的药效浓度分别为7.64mg/mL、104.25mg/mL、26.06mg/mL、125.00mg/ml 时,均对 7 种试验菌有抑菌作用;除茶树油组对乙型溶血性链球菌无杀菌作用外,各药物组亦均对7种试验菌有杀菌作用。根据茶树油与KBN制剂FIC指数可知,5.66%茶树油—KBN制剂对多数试验菌抗菌呈协同或相加作用,具有—定的广谱抗菌作用。5.正常对照组白色念珠菌近似圆形,细胞膜、细胞壁结构完整明显;阳性对照组白色念珠菌呈“空壳”状,细胞膜、细胞壁等结构破损而不完整;实验组白色念珠菌细胞膜严重缺失,且遭到连续性破坏,细胞壁结构疏松,且有裂口,胞浆内容物外漏。结论:茶树油与KBN触变凝胶剂具有体外协同抗真菌作用,可考虑将2.91%茶树油—KBN制剂(最佳协同杀菌配伍比例)浓度为26.06mg/ml,作为VVC易感人群沐浴露,或需药物在局部长时间滞留的凝胶剂、栓剂等日化产品剂量浓度的开发;可考虑将5.66%茶树油—KBN制剂(最佳抑菌配伍比例)浓度为26.06mg/mL,作为广谱抗菌日化产品剂量浓度的开发;两药协同抗菌作用,可能通过改变菌体内部超微结构(细胞膜、细胞壁、细胞核)而实现。上述研究,将国外天然植物药研究成果与中医药的理论、经验相结合,充分体现两药联合抗菌的特色和优势,为后续妆字号、消字号等日化健康产品的开发提供了理论依据,功效诉求的实现效果更佳,具有良好的市场前景。