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目的:研究RNA干扰抑制细胞骨架改建对流体剪切力下成骨细胞增殖和分化的影响。
方法:原代培养BALB/c小鼠颅骨成骨细胞,采用RNA干扰沉默LIMK2基因抑制细胞骨架改建;以12 dyne/cm2流体剪切力对成骨细胞加载1h,应用噻唑蓝比色法(MTT)和酶动力学法检测成骨细胞增殖性能及碱性磷酸酶(ALP)活性;采用流式细胞仪检测细胞周期。对结果进行双因素方差分析。
结果:⑴采用RNA干扰抑制细胞骨架改建,可以对流体剪切力作用下成骨细胞的细胞周期中处于S期的细胞百分比起协同作用(P<.05);在无流体剪切力加载条件下,干扰组与非干扰组处于S期的细胞百分比差异无统计学意义(P>0.05)。流体剪切力加载1h能使加载组S期的细胞百分比显著升高(P<0.05);RNA干扰处理可显著提高加载组细胞周期中S期的细胞百分比(P<0.05)。⑵采用RNA干扰抑制细胞骨架改建,可以对流体剪切力作用下成骨细胞增殖性能起协同作用(P<0.05);在无流体剪切力加载条件下,干扰组与非干扰组增殖性能差异无统计学意义(P>0.05)。流体剪切力加载1h能使加载组增殖性能显著升高(P<0.05);RNA干扰处理可显著提高流体剪切力加载组的增殖性能(P<0.05)。⑶采用RNA干扰抑制细胞骨架改建,可以对流体剪切力作用下碱性磷酸酶活性起协同作用(P<0.05);在无流体剪切力加载条件下,干扰组与非干扰组碱性磷酸酶活性差异无统计学意义(P>0.05)。流体剪切力加载1h能使加载组碱性磷酸酶活性显著升高(P<0.05);RNA干扰处理可显著提高流体剪切力加载组的碱性磷酸酶活性(P<0.05)。
结论:采用RNA干扰抑制细胞骨架改建,可以促进流体剪切力作用下成骨细胞的增殖和分化。