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目的:基于聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)技术,构建一项检测体系,用于单纯疱疹病毒1型和2型、水痘-带状疱疹病毒、巨细胞病毒、E-B病毒、人类疱疹病毒6型和7型、人类疱疹病毒8型、腺病毒及人类T淋巴细胞白血病病毒1型相关眼病的快速病原诊断,辅助临床医生进行疾病的诊断与治疗。方法:选取并设计上述10种病毒的引物和探针,Blast比对,确定其特异性。合成靶基因并构建重组质粒,经质粒扩增提取、拷贝数计算和梯度稀释获取10、50、10~2、10~3、10~4、10~5、10~6 copies/ul的质粒标准品。10种病毒的不同浓度的质粒标准品分别行单重和多重荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,QPCR)检测,探究该体系的灵敏度、稳定性及特异性。病毒空斑形成单位法测定单纯疱疹病毒1型参考株KOS的病毒滴度;梯度稀释KOS株后,行病毒DNA提取和QPCR检测,探究该体系检测病毒株的实用性。选取眼部的临床样本,用该体系检测,得到的实验结果与普通PCR结果比较,探究体系检测样本的实用性。结果:10种不同浓度的病毒质粒标准品的单重和多重QPCR检测结果显示,阴性对照均无扩增,所有病毒的检测下限均可至50 copies/μL;单重和多重条件下构建的标准曲线中,所有病毒的决定系数均大于0.99,所有的扩增效率均在理想参考值范围90-110%之间。特异性实验中,各病毒之间的引物及探针不发生交叉反应,各病毒的检测之间相互独立。稳定性实验中,所有病毒的组内和组间结果之间的标准差均小于1.91、变异系数均小于4.63%。KOS株实验中,灵敏度为25 PFU/m L,标准曲线决定系数为0.9910,扩增效率为107.85%;所有的组内和组间标准差均小于0.68,所有的变异系数均小于2.07%。临床标本检测结果显示,该体系除与普通PCR检测结果具有良好的一致性以外,还能够定量检测标本中的病毒载量,对单纯疱疹病毒进行亚型检测,且可能具有更高的灵敏度。结论:本研究已初步构建一个可快速检测眼部组织中单纯疱疹病毒1型和2型、水痘-带状疱疹病毒、巨细胞病毒、E-B病毒、人类疱疹病毒6型和7型、人类疱疹病毒8型、腺病毒及人类T淋巴细胞白血病病毒1型的检测体系;该检测体系具有良好的灵敏度、稳定性、引物和探针特异性及一定的临床实用性,检测下限可达50 copies/μL。