【摘 要】
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在抗生素滥用并对人们带来严重危害的大环境下,开发新型天然抗菌活性物质变得尤为重要。近年来,从无脊椎动物体腔液中提取出的天然抗菌活性物质也逐渐成为研究的热点。可口革囊星虫作为我国特有的水产品资源其体腔液含量丰富,然而由于开发利用的不足造成了体腔液资源的极大浪费。本文以可口革囊星虫为原料,研究了体腔液的获取技术,并利用细菌生长曲线法、牛津杯法分析了体腔液的抗菌特性,同时采用葡聚糖凝胶柱层析法和液相色谱
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在抗生素滥用并对人们带来严重危害的大环境下,开发新型天然抗菌活性物质变得尤为重要。近年来,从无脊椎动物体腔液中提取出的天然抗菌活性物质也逐渐成为研究的热点。可口革囊星虫作为我国特有的水产品资源其体腔液含量丰富,然而由于开发利用的不足造成了体腔液资源的极大浪费。本文以可口革囊星虫为原料,研究了体腔液的获取技术,并利用细菌生长曲线法、牛津杯法分析了体腔液的抗菌特性,同时采用葡聚糖凝胶柱层析法和液相色谱-质联法对体腔液抗菌蛋白进行了分离纯化及其氨基酸序列的鉴定。主要实验结果如下:（1）可口革囊星虫体腔液提取技术的研究。低电压电击法中6 V电压电击下获取的体腔液效果较好,该条件下单位体积（30 mL）体腔液中多糖和蛋白质浓度分别为:0.163±0.005 mg/mL和0.295±0.006 mg/mL;直接解剖法下单位体积（30 mL）体腔液中多糖和蛋白质的浓度分别为:0.186±0.004 mg/mL和2.205±0.005 mg/mL。（2）可口革囊星虫体腔液抗菌特性的研究。可口革囊星虫体腔液对大肠杆菌、腐败希瓦氏菌和副溶血性弧菌有着较强的抑制能力,而对金黄色葡萄球菌、溶壁微球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌的效果不明显;将体腔液中多糖和蛋白质分离并分别对以上三种敏感菌做抗菌实验结果发现该可口革囊星虫体腔液抗菌物质为蛋白质。（3）可口革囊星虫体腔液抗菌蛋白稳定性研究。抗菌蛋白不耐高温,对紫外线敏感,不耐酸碱,对蛋白酶k和胰凝乳蛋白酶敏感,且金属离子对其抗菌效果有显著影响（P<0.05）;分离纯化后的蛋白对大肠杆菌、腐败希瓦氏菌、副溶血性弧菌的最小抑菌浓度分别为:36μg/mL、72μg/mL、8μg/mL。（4）可口革囊星虫体腔液抗菌蛋白的分离纯化及序列鉴定。可口革囊星虫体腔液抗菌蛋白为一种B6CPA3蛋白,该蛋白含有16个肽段,序列覆盖度达到99.2%,分子量大小约为13.629 kDa,蛋白理论序列中氨基酸个数为120,该体腔液抗菌蛋白的氨基酸序列为:VFYDDLDNQHK（缬氨酸-苯丙氨酸-酪氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-亮氨酸-天冬氨酸-天冬酰胺-谷酰胺-组氨酸-赖氨酸）。
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