核桃楸树皮中活性物质的提取与分析

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以核桃楸树皮为原料,用95%的乙醇提取其中的活性物质。依次用石油醚、氯仿和乙酸乙酯对乙醇提取物萃取分离后,对各萃取相及乙醇提取物进行生物活性测试。结果显示它们对试虫都具有毒杀和拒食作用,并且触杀作用比胃毒作用致虫死亡率高,药效快。核桃楸树皮抑菌活性成分相对集中于氯仿萃取相和乙酸乙酯萃取相中,二者对杨树叶枯病的最低抑菌浓度都是3.125mg/mL。活性测试为活性物质的提取和核桃楸树皮提取物在农林方面的应用提供了科学依据。先后用化学预试法、GC-MS联用分析法探索了乙酸乙酯相和氯仿相的化学组分。化学预试结果显示乙酸乙酯萃取相中含有酚类和鞣质、萘醌类、黄酮类、内酯和香豆素,可能含有机酸、不含葸醌及其甙类,GC-MS联用分离确认出其中14种化合物,占乙酸乙酯萃取相的94.61%,含量最大的化合物为1,2,3-苯三醇、胡桃醌和7-甲氧基-1-四氢萘酮,含量分别为42.31%、12.33%和11.26%;GC-MS联用分析初步确认出氯仿萃取相中的13中化合物,占氯仿萃取相的94.04%,含量最大的化合物是胡桃醌,占氯仿萃取相的36.65%;TLC和HPLC联合分离法探索了纯化胡桃醌的条件,乙酸乙酯萃取相最佳展开剂为氯仿∶丙酮=2∶1,氯仿萃取相最佳展开剂为氯仿∶丙酮=8∶1。化学组分的分析可以为活性物质的分离提纯工作提供参考。对胡桃醌的提取工艺、稳定性、生物活性及胡桃醌含量测定方法进行了研究。结果显示:用超声波提取、常规提取和索氏提取三种方法对核桃楸树皮进行提取,得到的胡桃醌占原料的质量百分比依次为0.00131%、0.00126%和0.00111%。超声波辅助浸提,减压蒸馏法提取法可以从核桃楸树皮中得到高纯度的胡桃醌,GC-MS联用分析显示提取产物中胡桃醌相对含量达到96.420%。产物的无色亚甲基蓝显色反应、碱液试验、傅立叶红外光谱、~1H NMR都显示提取产物具有胡桃醌的结构特征,这种提取高纯度胡桃醌的简便方法,对胡桃醌的应用具有重要意义。在胡桃醌溶液中添加吐温80会增加胡桃醌的稳定性;pH值和温度都对胡桃醌溶液的稳定性有较大的影响,pH值为4时胡桃醌最稳定,温度越高胡桃醌越不稳定,探索影响胡桃醌稳定性的因素对胡桃醌的生产和储存具有重要的意义。胡桃醌有很好的杀虫和抑菌性,胡桃醌对杨树叶枯病、杨树烂皮病、樟子松枯梢病都有很好的抑菌作用,其中的胡桃醌对杨树叶枯病的最低抑菌浓度为0.0625g/L。施药2d,胡桃醌对舞毒蛾触杀致死中浓度为0.83g/L。在检测波长为426nm处,首次采用简便易行的分光光度法测定核桃楸树皮中的胡桃醌含量为0.0933%,验证了此种方法的加样回收率为99.6%,重复性良好,测定结果与常用的HPLC法测定结果相近。
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