Dectin-1受体在真菌性角膜炎角膜上皮中的表达

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目的:观察树突状细胞相关性C-型凝集素-1(Dendritic cell-associated C-type lectin-1,dectin-1)受体在真菌性角膜炎角膜上皮中的表达,并与正常角膜上皮中dectin-1受体的表达进行对比并分析其意义。方法:2010年7月至2011年12月于青岛大学医学院附属医院就诊并行穿透性角膜移植术的真菌性角膜炎患者20例(20眼)为实验组,20例(20眼)健康供体角膜用于制作角膜植片后剩余周边角膜组织为对照组,刮取术中切取的实验组病变角膜病灶周边角膜上皮及对照组供体角膜周边角膜上皮,应用real-time RT-PCR技术检测实验组与对照组角膜上皮中dectin-1受体mRNA的表达。健康Wistar大鼠72只,雌雄不限,其中54只用于real-time RT-PCR实验:A1组6只(6眼)为空白对照组、B1组24只(24眼)为损伤对照组、Cl组24只(24眼)为真菌实验组,空白对照组不予处理,真菌实验组以右眼为实验眼,在刮除中央上皮的大鼠角膜滴入烟曲霉菌菌丝并覆盖自制角膜接触镜,建立真菌模型,损伤对照组左眼为损伤对照眼,仅覆盖角膜接触镜,造模后4h、8h、16h、24h处死大鼠,刮取角膜上皮;18只用于免疫组织化学实验,随机分为3组(各6眼):A2组空白对照组、B2组损伤对照组、C2组真菌实验组,造模后24h处死大鼠,取眼球。检测大鼠角膜上皮中dectin-1与toll样受体-4(toll-like receptor 4,TLR4)的表达。结果:Dectin-1受体mRNA在正常人及真菌性角膜炎患者角膜上皮中均有表达。Dectin-1和TLR4受体在大鼠空白对照眼及损伤对照眼角膜上皮中表达,空白对照组与损伤对照组角膜上皮中dectin-1、TLR4受体表达差异无统计学意义(F=1.325,P=0.288;F=0.455,P=0.768),真菌实验组角膜上皮中dectin-1和TLR4受体的表达较空白对照组升高(F=74.679,P=0.000;F=30.225,P=0.000)。真菌实验组角膜上皮中dectin-1受体mRNA的表达在刺激8h后开始升高(P=0.000),蛋白表达在刺激24h后升高(t=-27.983,P=0.000);TLR4受体mRNA表达在刺激4h后开始升高(P=0.001),蛋白表达在刺激24小时后升高(t=-30.650,P=0.000)。结论:Dectin-1受体在正常人及真菌性角膜炎患者的角膜上皮中表达。Dectin-1受体在大鼠正常角膜上皮中表达,烟曲霉菌菌丝可以引起大鼠角膜上皮dectin-1受体表达升高.Dectin-1可能作为模式识别受体参与大鼠真菌性角膜炎的固有免疫应答。
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