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复方苦参注射液(Compound Kushen Injection, CKI)又名岩舒注射液,收载于卫生部药品标准第14册,由苦参和白土苓两味药提取精制而成,具有抗肿瘤、镇痛、增强免疫等功效,主要用于减轻癌痛。苦参来源于豆科槐属植物苦参Sophora flavescens Ait的干燥根,白土苓为百合科肖菝葜属植物肖菝葜Heterosmilacis. japonica Kunth.、短柱肖菝葜H. yunnanensis Gapnep或华肖菝葜H. chinensis Wang的干燥块茎。CKI以两味药粉末(苦参1400g、白土苓600g)为原料,经1%醋酸水浸渍渗漉提取,药渣水提,合并浓缩,反复醇沉、活性碳脱色及NaOH调pH,加注射用水而得。本文以CKI为研究对象,通过化学分离、化合物结构鉴定及LC-MS成分指认等方法明确其物质基础,初步建立了CKI指纹图谱标准,并对现有CKI质量控制方法进行优化,为中药大品种技术改造,生产更加安全、有效、质量稳定可控的中药注射液奠定基础。研究采用HPD100大孔树脂对注射液进行粗分,经过反复硅胶柱层析、Sephadex LH-20、ODS和半制备液相色谱纯化,从中分离得到了11个化合物；通过各种波谱数据和理化性质,鉴定了化合物的结构,均为首次从该注射液中分离得到,分别是番石榴酸、大泽米苷、腺嘌呤、氧化苦参碱、苦参碱、氧化槐果碱、槐果碱、N-甲基金雀花碱、鹰靛叶碱、鹅掌楸苷和三叶豆紫檀苷。通过对LC-MS数据分析,指认了注射液中其它12个微量成分,包括5α,9α-羟基苦参碱、氧化槐花醇、氧化槐定碱、9α-羟基槐果碱、槐定碱、槐花醇、异槐果碱、7,11-去氢苦参碱、5,6-dehydrolupanine、9α-羟基苦参碱、lamprolobine和异苦参碱。为了全面地反映CKI所含化学成分的种类和数量,提高产品批与批间的稳定性,本研究初步建立了CK!指纹图谱标准。采用Luna C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)；流动相A：0.01mol·L-1醋酸铵水溶液(氨水调pH值8.0),流动相B：乙腈-0.01mol·L-1的醋酸铵水溶液=9：1,线性梯度洗脱：0min→60min,A：B=100：0→A：B=60：40；流速为0.8mL·min-1；柱温为35℃；检测波长：225nm。在上述色谱条件下共测试了27批CKI样品,使用《中药指纹图谱相似度评价软件》以生成的对照指纹图谱为参照进行相似度分析,其中24批相似度均在0.85以上；选择各批注射液色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰,8个共有峰占总峰面积的百分比依次为28.2%、3.3%、20.6%、7.9%、2.8%、10.3%、4.9%和1.9%,它们的百分比之和为80.0%。暂定复方苦参注射液指纹图谱标准为：供试品的图谱应与对照指纹谱图一致；用氧化苦参碱及对照指纹谱图中标示的色谱峰校正后,相似度应不低于0.85。针对CKI现行质量标准(WS3-B-2752-97)采用酸碱滴定法测定总生物碱的含量,对其中非生物碱成分没有质量控制指标,不能有效地控制CKI的产品质量等问题,开展了CKI质量标准的提升工作。选取CKI中含量较高,且有抗肿瘤活性的氧化苦参碱、氧化槐果碱、N-甲基金雀花碱、苦参碱、槐果碱和黄酮类主要成分三叶豆紫檀苷作为质控指标,建立了CKI中6个主要成分的HPLC同步测定方法。采用Luna C18柱(4.6mm×250mm,5μmn)；柱温35。C；流动相A：0.01mol·L-1醋酸铵水溶液(氨水调节pH=8.0),流动相B：乙腈：0.01mol·L-1醋酸铵水溶液=3：2；线性梯度洗脱：0min,A：B=80：20,8min,A：B=50：50,10min,A：B=47：53,25min,A：B=40：60；流速：0.8mL·min-1；检测波长225nm。方法学考察结果表明方法稳定、可靠。采用建立的方法测定了2008年至2010年随机抽取的19批CKI样品,结果表明,各样品均含有氧化苦参碱、氧化槐果碱、N-甲基金雀花碱、苦参碱、槐果碱和三叶豆紫檀苷,但是不同批次样品之间各指标成分含量存在差异。此方法适合用于CKI生产过程以及成品中多成分的质量控制,且增加了对注射液中黄酮类成分的含量测定,使CKI质量控制方法更为全面。