目的:研究石家庄地区优势蝇种巨尾阿丽蝇(Aldrichina grahami)、大头金蝇(Chrysomya megacephala)、丝光绿蝇(Lucilia sericata)幼虫生长发育规律,探讨温度对其发育的影响,积累石家庄地区尸食性蝇类的发育生物学资料,为刑事调查推断死后间隔时间(Postmortem interval,PMI)提供科学依据。方法:在河北医科大学校园内诱捕巨尾阿丽蝇、大头金蝇、丝光绿蝇,带回实验室饲养至第三代作为母代开始实验。设定生化培养箱的温度依次为20℃、24℃、28℃,在所设的温度条件下,湿度、光周期、食物种类和数量均不变。从幼虫孵出开始,每隔12h留取一次标本,每组每次留取10头幼虫,直至化蛹。幼虫用80℃热水烫死,然后放入浓度为70%甘油酒精中保存。从保存液中取出幼虫标本后,吸干表面液体,放在培养皿上,用大头针在幼虫腹部一侧扎几个小孔,放入10% KOH溶液中消化内部组织,24h后将幼虫从KOH溶液中取出,放在培养皿上用镊子轻轻按压幼虫,直至将体内已消化的组织排出。幼虫在清水中洗净数遍后,在体视显微镜下利用解剖剪、手术刀选取头节至其后2个胸节部分(供前气门、头咽骨标本制作)和第8腹节之后的部分(供后气门标本制作),用于形态观察的标本依次用30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%的酒精中逐级脱水,最后用二甲苯透明,镜下整姿后滴加加拿大树胶封片,置于阴凉处风干。光学显微镜下观察、拍照。用于图像分析指标测定的标本需在体视显微镜下将前气门、后气门周围的表皮去除,头咽骨进行对称分离后再依以上标本制作过程制成封片标本,利用计算机图像分析系统对前气门、后气门、头咽骨的多项指标进行测定。以上所有数据结果由SPSS 13.0软件处理得出,相同温度下各组指标的变化进行单因素方差分析,应用Excel程序作图。结果:1前气门形态学特征1.1在恒定温度下,随着幼虫的发育,巨尾阿丽蝇、大头金蝇、丝光绿蝇幼虫各组前气门均于2龄期出现。巨尾阿丽蝇和丝光绿蝇指状突7~10个、大头金蝇指状突10~14个,均呈一排,随着龄期的更替颜色由淡黄色逐渐加深,色素管部由2龄期的细长型逐渐变为3龄期的粗短型。1.2巨尾阿丽蝇、大头金蝇、丝光绿蝇幼虫各组前气门色素管部面积,由2龄初期最小值随时间的延长,数值迅速增加,达到最大值后又迅速下降,进入平台期。幼虫前气门色素管部长宽比,由2龄初期最大值,随时间延长呈现持续性下降的趋势,一直持续到3龄末。幼虫前气门色素管部平均光密度,随时间延长20℃至28℃各组幼虫呈现持续性增加的趋势,并一直持续到3龄末。但3龄期各组前气门色素管部长宽比和平均光密度变化趋势均较2龄期变化平缓。2后气门形态学特征2.1在恒定温度下,巨尾阿丽蝇、大头金蝇、丝光绿蝇幼虫后气门由1龄的1裂无气门环,变为2龄的1孔2裂,开放的气门环,最后变为3龄的1孔3裂完整的气门环。面积逐渐增大,颜色由2龄初期的淡黄色逐渐加深为3龄末的棕褐色甚至黑色。2.2巨尾阿丽蝇、大头金蝇、丝光绿蝇幼虫各组后气门平均光密度与其前气门色素管部平均光密度的变化趋势一致,均随时间的延长呈持续性增长至3龄末。然而,后气门平均光密度在20℃至28℃各组幼虫龄期内增长速度较大,在龄期间增长速度平缓,比前气门色素管部平均光密度更适宜于进行幼虫日龄的推测。3头咽骨形态学特征3.1在恒定温度下,随着幼虫的发育,巨尾阿丽蝇、大头金蝇、丝光绿蝇幼虫头咽骨的颜色由淡黄色逐渐变为棕褐色,最后发展至黑褐色,几丁质化程度不断加强,骨化的范围不断增大,巨尾阿丽蝇幼虫在2龄期出现小杆状附口骨,大头金蝇幼虫在3龄期出现点状附口骨,丝光绿蝇幼虫无附口骨。3.2幼虫口钩面积随时间的延长呈阶段性增加,龄期更替时变化显著,尤以2、3龄更替时最显著。面积达到最大值后,随时间的延长基本维持不变。幼虫口钩平均光密度和骨化面积的变化趋势与口钩面积的变化趋势相似,但达到最大值的时间明显延迟。3.3幼虫咽骨面积的变化趋势与口钩面积的变化趋势相同。随时间的延长20℃至28℃各组幼虫咽骨平均光密度和骨化面积呈现持续性增加的趋势,并一直保持到3龄结束,是推测PMI的理想指标。在不同温度下,两者的发育速率与温度成正比,随温度升高而加快,龄期越短平均光密度和骨化面积达到最大值的时间就越短。结论:1巨尾阿丽蝇、大头金蝇、丝光绿蝇幼虫各组前气门色素管部面积,由2龄初期最小值随时间的延长迅速增加,达到最大值后又迅速下降,进入平台期。幼虫前气门色素管部长宽比及平均光密度变化趋势单一,在整个幼虫发育过程中始终保持上升或下降的趋势。2三种幼虫各组后气门平均光密度均随时间的延长呈持续性增长至3龄末,该指标在龄期内增长速度较大,在龄期间增长速度平缓,比前气门色素管部的平均光密度更适宜于进行幼虫日龄的推测。3三种幼虫各组口钩面积、骨化面积和平均光密度均随时间的延长而增加,龄期更替时变化显著,但进入3龄达到最大值即进入平台期。4三种幼虫各组咽骨面积的变化趋势与口钩面积的变化趋势相同。但咽骨骨化面积和平均光密度随时间的延长呈现持续性增加的趋势,并一直保持到3龄结束,是推测PMI的理想指标。