【摘 要】
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目的观察人视网膜色素上皮细胞(human retinal pigment epithelium,HRPE)体外培养时的分化规律,研究人玻璃体液对体外培养的HRPE形态、增殖、分化等生物学特性的影响,探讨玻
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目的观察人视网膜色素上皮细胞(human retinal pigment epithelium,HRPE)体外培养时的分化规律,研究人玻璃体液对体外培养的HRPE形态、增殖、分化等生物学特性的影响,探讨玻璃体液在增殖性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinoathy,PVR)中的作用.方法建立HRPE原代培养方法并进行传代扩增,观察细胞形态变化特征,采用western blot法,分别检测角蛋白18(cytokeratin 18, CK18)、波形蛋白(vimentin)、平滑肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)在第二、五、八代细胞中的表达情况,分析HRPE体外分化规律.采用MTT法检测在有无血清时12.5﹪、25﹪、50﹪浓度的玻璃体液对第五代HRPE增殖的影响;用含25﹪玻璃体液的培养液处理第五代HRPE,对比观察细胞形态变化,并行透射电镜观察超微结构改变,采用免疫细胞化学及western blot法,检测CK18、vimentin、α-SMA表达变化.结论1.HRPE体外培养时,发生"上皮——间质转化"(epithelial- mensenchymal transition),细胞骨架蛋自CK18和α-SMA发生明显改变,可作为其分化时移行和收缩的客观指标.2.人玻璃体液明显促进HRPE向间质型细胞转化,细胞形态和超微结构发生明显改变,并使HRPE移行能力下降,而收缩功能加强.3.一定浓度人玻璃体液在血清的参与下,明显促进了HRPE的增殖.4.该研究提示玻璃体液促进了PVR的发展.
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