【摘 要】
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库尔勒香梨是新疆名优特产瓜果,因其独特的风味受到国内外消费者的亲睐.但近年来其外形色泽发生变化、口感降低、品质退化,严重威胁这一名优水果的生产和发展.据报道这种情况
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库尔勒香梨是新疆名优特产瓜果,因其独特的风味受到国内外消费者的亲睐.但近年来其外形色泽发生变化、口感降低、品质退化,严重威胁这一名优水果的生产和发展.据报道这种情况的发生与病毒病的发生存在一定关系,而病毒感染库尔勒香梨后不产生明显的症状,对早期诊断和预防造成了极大的困难.血清学方法灵敏、快速己广泛用于大批量的病毒检测.从库尔勒香梨分离获得2个病毒分离物,经鉴定为苹果褪绿叶斑病毒(Apple chloroti cleaf spot virus,ACLSV)和苹果茎沟病毒(Apple stem groo ving virus,ASGV).该论文在抗血清制备中,改变传统的抗原提取方法,采用基因工程的方法获得抗原,根据已报道的ACLSV不同分离物P863、P205和A-BaII的核苷酸序列设计引物,通过PCR扩增、克隆和测序,得到ACLSV库尔勒香梨分离物外壳蛋白基因全长cDNA,长849bp,分析所得序列,含有一个开放阅读框架(open readi ng frame,ORF),ORF起始于56-58nt的起始密码子AUG,终止于635-637nt的终止密码子UAA,长582bp,推测编码一个由193个氨基酸组成,分子量约22kDa的蛋白质.与已报道的P863、P205和A-BaII的外壳蛋白基因序列分析比较,结果表明,核苷酸序列同源性分别为81.2%、86.1%和80.0%,氨基酸序列同源性分别为88.0%、89.6%和84.9%.再根据序列分析结果构建ACLSV外壳蛋白基因原核表达载体,通过原核表达及提纯,获得ACLSV外壳蛋白,以提纯产物为抗原免疫家兔,制备出了ACLSV特异性抗血清.经western bl otti ng检测,能特异性的检测植物组织中的ACLSV,这为今后对库尔勒香梨ACLSV的检测和发病率的进一步调查研究,以及无毒苗木的检测提供了必须的抗血清.
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