论文部分内容阅读
目的:观察阳和平喘颗粒对骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植后支气管哮喘(Asthma)大鼠气道炎症及CD4+CD25+调节性T细胞、信号转导及转录激活因子6(STAT6)的影响,并探讨其具体作用机制。方法:选取清洁级SD大鼠70只并随机分为7组,每组10只,分别为正常对照组、模型对照组、BMSCs移植对照组、BMSCs移植去除Treg组,BMSCs移植去除Treg加阳和平喘颗粒干预组、BMSCs阳和平喘颗粒干预组、BMSCs地塞米松干预组;采用卵清白蛋白(OVA)致敏和激发制备哮喘模型,尾静脉注射小鼠抗大鼠CD25+单克隆抗体、BMSCs细胞悬液,并予以相应药物干预6周。肺组织HE染色观察病理形态学变化,瑞氏染色计数支气管肺泡灌洗液(BALF)炎性细胞总数及各种类炎性细胞数目,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定血清中IL-4、IL-5、IL-13含量,流式细胞术(FCM)检测外周血CD4+CD25+调节性T细胞比例;实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(Q-PCR)及蛋白质印迹法(Western blot)分别检测大鼠肺组织STAT6m RNA和蛋白的表达。结果:1镜下观察分离后培养的BMSCs形态为梭形、纺锤形、多边形等类似成纤维细胞样形态,且呈集落样生长,能够扩增、传代;培养至第4代的BMSCs经FCM检测其表面标志CD44为98.69%、CD29为99.67%、CD45为0.15%、CD11b/c为0.26%,细胞纯度高,并且经诱导培养后可分化为成骨细胞、脂肪细胞,结果符合BMSCs的特征。2与正常对照组相比,模型对照组大鼠气道、肺组织内炎性细胞浸润明显,以嗜酸性粒细胞为主,气道上皮增生、管径狭窄,内含大量粘液,BALF中炎性细胞计数及血清IL-4、IL-5、IL-13含量明显升高(P<0.01);与模型对照组相比,经过BMSCs移植的各组大鼠肺组织病理形态改变均有不同程度的好转,BALF炎性细胞计数及血清IL-4、IL-5、IL-13含量降低(P<0.05);而予以BMSCs阳和平喘颗粒干预组、BMSCs地塞米松干预组的大鼠气管粘膜修复较完整、杯状细胞增生减轻,肺组织内炎性细胞浸润减少,BALF炎性细胞计数及血清IL-4、IL-5、IL-13含量较模型组、BMSCs组降低(P<0.05)。3模型对照组大鼠外周血中CD4+CD25+调节性T细胞比例显著降低,肺组织STAT6m RNA及蛋白表达量显著升高(P<0.01);与模型对照组相比,经BMSCs移植后哮喘大鼠CD4+CD25+调节性T细胞比例升高,STAT6蛋白及m RNA表达降低(P<0.05);与BMSCs移植对照组相比,BMSCs阳和平喘颗粒干预组、BMSCs第地塞米松干预组CD4+CD25+调节性T细胞比例显著升高,STAT6蛋白及m RNA表达显著降低(P<0.01)结论:1全骨髓贴壁法能够有效的分离、培养SD大鼠BMSCs,且分离后培养的BMSCs形态较均一,经过多次传代后纯度高,仍具有自我更新能力及多向分化潜能。2静脉输注BMSCs能降低哮喘大鼠BALF中炎性细胞数目、血清IL-4、IL-5、IL-13及肺组织STAT6含量,提高外周血CD4+CD25+调节性T细胞比例,减缓气道炎症。3阳和平喘颗粒降低BMSCs移植哮喘大鼠BALF中炎性细胞数目、血清IL-4、IL-5、IL-13含量,对哮喘大鼠气道炎症有进一步的干预作用。4阳和平喘颗粒对BMSCs移植哮喘大鼠CD4+CD25+调节性T细胞、STAT6的表达存在调控作用,从而进一步改善气道炎症。