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DNA是细胞中的遗传物质,DNA的结构完整性对于细胞功能的正常发挥至关重要。然而,生物体中的细胞常常受到内源性或外源性的因素影响而导致DNA损伤。在众多DNA损伤类型中,DNA双链断裂损伤(DSB)是最严重的一种类型。当发生DNA双链断裂损伤时,细胞会做出一系列应答反应,即DNA损伤应答。其中,一个关键的应答反应是细胞周期阻滞,即DNA损伤会激活细胞周期检验点,阻止细胞周期的继续运行。细胞周期阻滞能够为DNA修复提供有效时间,同时防止带有损伤DNA的细胞进入到分裂期。CtIP(Carboxy-terminal Binding Protein)是CtBP相互作用蛋白,最初作为转录辅助因子被发现。研究发现,CtIP参与DNA损伤应答、转录调节和肿瘤发生等过程。目前对于CtIP在DNA双链断裂损伤应答中的作用研究主要集中在DNA损伤修复中。CtIP具有核酸内切酶功能和转录调节功能,而CtIP功能的发挥离不开其自身的翻译后修饰,其中检验点蛋白激酶ATM和细胞周期蛋白激酶CDK的磷酸化修饰对CtIP的活性至关重要。有研究发现,CtIP通过蛋白激酶Chk1促进细胞周期检查点信号的传递。但对于CtIP在DSB引起的细胞周期阻滞中发挥的功能的探索还远远不够。本研究以依托泊苷(Etoposide,ETO)作为DNA双链断裂损伤药物,采用Western Blot、Real time-PCR、细胞周期测定、细胞凋亡测定、细胞存活率测定等实验技术。探究了DSB背景下CtIP在细胞周期阻滞中的作用及机制。主要研究结果如下:(1)我们通过检测DNA双链断裂损伤对CtIP表达的影响,以及敲低CtIP后细胞在DSB时的存活率和凋亡情况,确定了CtIP参与DNA双链断裂损伤应答。(2)通过敲低CtIP检测其对DSB时细胞周期检验点和细胞周期相关蛋白表达的影响,发现CtIP促进DSB时细胞G2/M期阻滞。(3)通过Real time-PCR和Western Blot实验发现CtIP影响p21的表达,但不影响p21的上游蛋白p53的表达。通过测定p53单缺失及p53和CtIP共缺失时细胞G2/M期阻滞情况,确定了DSB时CtIP不通过p53-p21通路促进细胞G2/M期阻滞。(4)我们进一步发现CtIP的Ser327位点突变减弱DSB时细胞的G2/M期阻滞,并且CtIP的缺失使ATR-Chk1-CDC25C检验点通路减弱,表明CtIP的核酸内切酶功能对DSB引起的细胞G2/M期阻滞至关重要。本论文明确了DNA双链断裂损伤下CtIP参与细胞周期阻滞并探索了相关作用机制。论文结果为CtIP在DNA双链断裂损伤应答中的作用研究提供了新的线索,为细胞周期阻滞方面的基础研究增添了新资料。