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本文主要分为Ⅱ型胶原蛋白(Collagen TypeⅡ,CⅡ)的提纯及其对佐剂性关节炎(Adjuvant Arthritis,AA)作用的研究两部分。首先以羊肋软骨为原料,选用酶解法进行CⅡ的提纯;其次选用KM系小鼠作动物试验,研究口服CⅡ对AA的作用。 以羊软骨为原料,首先进行去除骨筋膜等的前处理,然后用盐酸胍抽提蛋白多糖,酸性条件下酶解,最后过夜盐析,离心所得絮状沉淀即为CⅡ。SDS-PAGE电泳结果表明:自提CⅡ样品与CⅡ标准品电泳结果带型一致。并且纯度测定结果为93.12%。 动物模型的建立方法采用类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)动物模型中较为经典的完全弗氏佐剂(Freund scomplete adjuvant,CFA)诱导法。为确定最佳灌胃(Intragastric Administration,ig)剂量进行了0.4ml、0.6ml、0.8ml三个剂量的预试验,结果表明:每只小鼠每天灌胃0.6ml/d自提CⅡ溶液为最佳剂量。试验动物选用体重、年龄相近的60只KM系小鼠,随机分为四组:正常(A组)、预防灌胃CⅡ组(B组)、治疗灌胃CⅡ组(C组)、模型组(D组)。各组每周测定体重一次,致炎后每隔两天测定双足足底厚度一次,于致炎后24天全部处死、采血、收集血清,测定部分血清指标和部分器官重量。 试验结果表明:(1)各组小鼠体重在试验全程中的变化趋势:A组变化幅度不明显;B组在致炎3d后呈缓慢增加趋势;C组开始变化不明显,致炎10d后体重呈明显增加趋势;D组呈现先降低后缓慢增加的变化趋势。说明致炎后严重抑制小鼠的体重增长;B组和C组对小鼠体重的恢复均有促进作用,并且前者效果更明显。(2)B组致炎12d后AA小鼠关节炎症程度明显降低,C组致炎14d后AA小鼠关节炎症程度降低;D组原发性炎症一侧(右足)一直处于炎症加重趋势;继发性炎症一侧(左足)开始一直加重,在致炎18d后有所减轻。(3)D组小鼠血清中IL-1值比A组显著升高(p<0.01),B组显著低于A组(p<0.05);C组与A组无显著差异(p>0.05);说明B组和C组均可以减轻炎症,且前者效果优于后者。(4)D组小鼠血清中NO浓度显著高于A组(p<0.01),而B组和C组均显著低于A组(p<0.01)。(5)D组小鼠血清中SOD值较A组显著偏低(p<0.01),而MDA值显著升高(p<0.05);B组和C组SOD值明显高于A组(p<0.01)。(6)比较各器官重,以肝脏重变化最为明显:A组显著低于B组(p<0.01);A组与C组无显著差异(p>0.05);B组显著高于其他三组(p<0.01);说明B组效果最好。