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目的:应用核酸试纸条,建立一种能对单核苷酸多态性和单碱基突变进行快速检测方法。
方法:本文介绍了一种结合核酸检测试纸条(Nucleic Acid Strip,NAS),聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)和连接酶检测反应(Ligase Detection Reaction,LDR)技术而建立的一种能快速准确检测单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphisms,SNP)和单碱基突变的方法,即单核苷酸多态性核酸试纸条检测技术(Single NucleotidePolymorphisms Nucleotide Strip-test,SNP-NST)。SNP-NST主要分为三个步骤:通过PCR扩增包含SNP位点/单碱基突变的基因序列;用两条特异性连接探针与扩增产物进行退火结合,并在Taq DNA ligase的作用下进行连接反应;对连接产物进行变性后用NAS进行检测,只有由两条探针连接在一起的产物才能在NAS上显示出红色的条带。我们对SNP-NST的每个步骤进行了优化。
结果:以SNP-NAS技术对50例乙型肝炎患者拉米夫定耐药进行检测,并将检测结果与DNA测序和PCR-RFLP检测进行对比,符合率分别为90%和94%。
结论:本文将PCR,IDR和NAS有机地结合在一起,建立了一种快速检测SNP和单碱基突变的方法——SNP-NAS。实验结果表明本方法不仅有很高的特异性和灵敏度,而且操作简便、快速,适合于各级医院尤其是中小型医院对SNP和单碱基突变的筛查。