获得性免疫缺陷综合征(Acquired Immunodeficiency Syndrome,AIDS),即艾滋病,是人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV)感染引起的慢性传染病。随着高效抗逆转录病毒疗法(Highly Active Antiretroviral Therapy,HAART)的全面推广,HIV感染已变得可控,但仍危害全球人类健康甚至致命。尽管HAART能够有效地抑制病毒复制,降低感染者的病毒载量,但却有着经济负担、终身用药以及长期服药带来毒副作用等缺点,一旦药物治疗失败就会产生耐药性病毒株。另一方面,尽管HAART可以延长患者的生命,却不能完全治愈并且会产生病毒血症。因此,随着对HIV感染宿主机制的了解加深,有必要发明一种更有效的治疗方法来作为单独或辅助的治疗方式。目的:利用类转录激活因子效应物核酸酶(Transcription Activator-like Effector Nuclease,TALEN)技术,在人的Jurkat T细胞里探讨定点编辑CCR5特定32 bp对HIV-1假病毒感染抑制的可能性。方法:针对人的CCR5基因特定32 bp处,设计一对TALEN和一个同源重组质粒;采用测序方法来评估在Jurkat T细胞中CCR5定点敲除准确性;利用定量PCR分析HIV-1假病毒的感染效率。结果:1.构建的TALEN质粒对CCR5基因敲除总效率为78.3%(47/60),其中16个克隆发生了CCR5基因特定32 bp(Δ32)定点敲除,基因定点敲除效率为26.7%(16/60);2.利用构建的针对CCR5特定32 bp设计的TALEN和Knock in质粒转染T细胞后,处理组的m RNA中p24平均达到47.9%;3.TALEN技术基因定点编辑后Jurkat T细胞中的CCR5蛋白的表达平均为60.6%。较p24含量52.1%的降低,CCR5蛋白的表达量只有39.4%的抑制。即构建的TALEN质粒可以高效地识别CCR5基因特定32 bp区域,同时部分影响到细胞表面CCR5蛋白的表达;利用TALEN技术定点编辑CCR5可抑制HIV-1假病毒在体外感染。结论:TALEN作为一个可进行基因编辑和敲除的有效工具,在HIV基因治疗方面具有潜在的重要意义。它提供了一个强有力的手段,通过对CCR5进行敲除或改变宿主因素去根除HIV的感染。在这里,我们成功构建出一个有效抑制HIV-1感染的TALEN质粒,为进一步研究HIV-1感染机制奠定了工作基础。