目的:癫痫为神经内科一组常见的综合征,各个年龄阶段均可发生,该病症可反复发作,如不及时治疗会威及生命。现已有多种抗癫痫药物相继问世,但这些药物大部分以控制症状为主,且治疗疗程长、副作用相对较多,部分患者遵医嘱服用药物后仍不能控制症状。常有患者因治疗过程中停药或未经医师指导换药而功亏一篑,其难治性给患者及家属带来生活和心理上的极大压力。癫痫是由脑部异常放电所产生的脑部功能紊乱引起的。有研究证据表明,癫痫的多次发作后可对中枢神经系统产生不可逆的损伤,尤以海马等边缘系统神经元的损伤为甚。癫痫发作可使中枢神经系统出现形式多样的病理改变,包括神经元丢失、凋亡、胶质纤维增生、苔藓纤维增多等,其中细胞凋亡是神经元损伤的主要形式。癫痫对于脑部的损伤是严重的,但目前尚无有效的脑保护药物。厚朴酚是一种传统中药,有研究显示其单体具有中枢镇静、抑制炎症反应、抗衰老等多种药理学作用。这种单体有否保护癫痫脑损伤的作用是一个值得研究的课题。本研究拟以戊四氮(PTZ)慢性致痫的SD大鼠作为对象,用厚朴酚单体成分进行干预,通过行为学、免疫组织化学和Western bolt等技术方法,检测其在改善行为、保护神经元的作用,为研制新型抗癫痫损伤药物提供基础研究资料。方法:SPF级成年雄性SD大鼠75只,实验起始体重200±20g,随机均分为溶媒对照组(NS)、单纯戊四氮致痫组(PTZ)、高剂量厚朴酚+PTZ组(H)、中剂量厚朴酚+PTZ组(M)和低剂量厚朴酚+PTZ组(L),用腹腔注射PTZ方法复制癫痫动物模型。以PTZ点燃癫痫发生率评价其为行变化,通过尼氏染色观察海马神经元形态和数量的变化,用Western bolt、免疫组化检测海马凋亡因子Caspase-3的表达、免疫酶联法检测TNF-α的表达以检测对细胞的保护作用。结果:1行为学观察结果对第7天,14天,21天,28天,35天和42天的点燃率的统计中,PTZ组大鼠点燃率均显著大于各药物控制组及NS组,并随着厚朴酚干预剂量的增加PTZ点燃率有下降趋势。2免疫酶联法检测各组大鼠海马区的TNF-α表达结果各组大鼠海马组织中PTZ组(284.45±20.70)的TNF-α表达量显著性地高于其他组(P<0.05);NS组(144.01±28.85)则低于其他各组;在药物干预组中,高剂量组(186.43±21.34)、中剂量组(189.44±22.12)、低剂量组(192.14±39.01)间无显著性差异(P>0.1)。3 Western bolt检测各组大鼠海马区Caspase-3蛋白表达水平PTZ组大鼠海马组织Caspase-3蛋白水平(3.01±0.56)显著地高于其他各组(P<0.05);药物干预组中,低剂量组(2.50±0.46)显著高于其他两组(P<0.05);中剂量组(1.98±0.40)高于高剂量组(1.44±0.32)(P<0.05);NS组表达量最少(P<0.05)。4免疫组化检测各组大鼠海马区Caspase-3阳性神经元的结果PTZ组的Caspase-3阳性细胞数,在CA1区(76.57±5.79)和CA3区(71.05±5.11)均显著高于各药物干预组(P<0.05);NS组的CA1区(31.12±5.01)、CA3区(17.55±3.56)均显著低于其余各组的阳性细胞数;3个药物干预组的海马CA1区的Caspase-3阳性细胞数则随剂量的增加而显著减少(P<0.05),既低剂量组(57.33±7.26)>中剂量组(47.81±5.99)>高剂量组(39.57±4.16);而在海马CA3区,低剂量组(47.98±4.33)显著多于高剂量组(33.63±1.13)和中剂量组(33.78±4.39)(P<0.05),但高、中两组间无显著性差异(P>0.05)。5尼氏染色检测海马区神经元形态和数量的结果PTZ组海马区CA1和CA3区的神经元显示出细胞固缩、核分离和溶解等细胞凋亡的特征,且细胞数量明显减少、排列散乱。药物控制组亦可见少量神经元肿胀,胞核染色深浅不均等现象,但神经元数量较比PTZ组明显增多、损伤小、细胞排列较规整。NS组海马CA1及CA3区海马结构相对完整,椎体细胞排列规整,胞浆呈均匀染色清晰的紫蓝色,未见明显丢失。上述5项检测结果显示,较比模型动物,厚朴酚干预后大鼠的癫痫点燃率、海马区凋亡因子(Caspase-3、TNF-α)的表达水平均显著降低、细胞的存活数量显著升高,细胞形态也明显好于PTZ组,有明显的剂量依赖关系。结论:1厚朴酚能显著地抑制PTZ的致痫作用,其效果有剂量依赖性;2厚朴酚能对癫痫脑损伤有明显的保护作用,有显著的量效关系;3厚朴酚对海马神经元的保护作用与降低TNF-α的释放和Caspase-3的表达有关,可能是通过降低TNF-α-Caspase-3-凋亡信号通路的作用实现其保护功能的。