论文部分内容阅读
Noni(Morindacitrifolia.L)属茜草(Rubiacean)科，是一种矮小的长绿灌木。Noni主要生长在热带、亚热带地区。主产地有夏威夷、大溪地和库克群岛等。在我国台湾、海南、西沙群岛也有少量野生分布，中文名为海巴戟天。研究表明，Noni具有抗癌、杀菌、降血压、止痛、消炎、抗氧化、抗病毒、抗疲劳等功效。国外流行多种Noni产品，包括口服液、果汁、美容化妆产品、药品等。目前，此类产品在我国市场亦有销售。
本文以库克群岛乳制品厂生产的Noni果汁为研究对象，采用现代分析和生物学方法，对Noni果汁的营养成分以及莨菪亭、芦丁、多糖等活性成分进行了测定，对多糖的组成和结构进行了初步研究；并对Noni果汁体外清除自由基和抗氧化的能力进行了测试；其研究结果可为Noni作为药食两用资源的开发与利用奠定相关的理论和应用基础。现将本文主要研究结果归纳如下。
1.采用考马斯亮蓝法、酸水解法(GB)、蒽酮-硫酸法和恒重法(GB)分别测定了Noni果汁中蛋白质、脂肪、糖类和总灰分的含量。
2.建立了Noni果汁中游离态抗坏血酸(Vc)、硫胺素(VB1)和烟酰胺(VB5)同步测定的反相高效液相色谱法(RP-HPLC)。其测定条件为：色谱柱为AlltimaC18柱，流动相为甲醇-0.01％磷酸(3∶7，V∶V)，流速为1.0mL/min，进样量为20μL，柱温为室温，采用二极管阵列检测器在251nm下检测。在上述色谱条件下三种维生素得到良好分离。结果表明，该方法灵敏度高，定量准确，重现性好，回收率高。所测Noni果汁中三种维生素的含量分别为：Vc0.354mg/mL，VB10.0663mg/mL，VB50.0131mg/mL。说明Noni果汁中三种必需维生素含量丰富，可作为维生素缺乏的营养补充剂。该方法可作为一种Noni果汁生产质量控制参考方法。
3.采用微波消解法处理样品，应用ICP-AES法对Noni果汁中必需的常量元素K、Ca、Na、Mg、P和微量元素Cu、Fe、Zn、Se、Co、Mn、Cr、Mo以及可能必需的元素Ni、B、V，还有对人体有潜在危害的元素Pb、As、Cd等20种元素进行了含量测定。结果发现，除As、Pb、Cd、Al和Ni未被检出外，其余15种元素在Noni果汁中均有不同含量的分布，说明Noni果汁中无机元素种类很丰富。实验结果显示，测定方法的精密度良好，相对标准偏差在0.81％～4.56％之间；回收率高，其回收率在96.80％～107.52％。
4.建立了测定库克Noni果汁中多糖含量及分子量的方法。通过醇沉法分离Noni果汁多糖，进一步分离纯化得到均一多糖组分；采用蒽酮-硫酸比色法，用精制Noni果汁多糖测得该多糖对葡萄糖的换算因子，对多糖含量进行定量测定，得多糖含量为5.619mg/mL；并通过SE-HPLC(SizeExclusion-HighPerformanceLiquidChromatography)法测定了该多糖的相对分子量。结果表明，多糖含量测定方法简便可行，供试液在4h内显色稳定，重现性较好，平均回收率为99.3％，RSD为1.93％(n=3)；测得该多糖的相对分子量为1140KDa。
5.Noni果汁多糖采用硫酸完全水解后，用盐酸羟胺和乙酸酐衍生水解产物，生成糖腈乙酸酯，进行GC-MS分析。Noni果汁多糖采用TFA完全水解后，PMP柱前衍生，然后用HPLC-UV分析测定。结果显示，Noni果汁多糖中的单糖组分有鼠李糖、半乳糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖和葡萄糖醛酸。两种方法定性，增强了分析结果的可靠性。
6.采用硫酸-咔唑法和考马斯亮蓝法分别测定Noni果汁多糖中的葡萄糖醛酸和蛋白质的含量。该方法简单，重现性和精密度都很好，可以得出较为准确的结果。结果表明，Noni果汁多糖中葡萄糖醛酸的含量为22.35％，蛋白含量为2.06％。
7.采用化学方法(高碘酸氧化法和稀碱处理)和仪器方法(紫外、红外)相结合，初步研究并获取了Noni果汁多糖的结构信息。结果显示，该多糖中存在1→6糖苷键，可能不存在O-糖肽键；存在-CHO和-COOH以及吡喃糖环结构。
8.采用RP-HPLC法测定了Noni果汁中莨菪亭和芦丁的含量。其色谱条件为：色谱柱为AlltimaC18柱(250mm×4.6mn，5μm)；流动相为甲醇∶水=0.35∶0.35(V∶V)，用磷酸调pH值至3.5；流速为0.70mL/min；检测器为二极管阵列检测器(DAD)；柱温为室温；进样量为20μL。同时，采用LC-ESI-TOF-MS对Noni果汁中可能存在的莨菪亭和芦丁进行定性。结果表明，Noni果汁中存在莨菪亭和芦丁；在上述色谱条件下，两种化合物分离良好；含量测定方法的精密度和重现性良好，回收率令人满意。
9.对Noni果汁多糖、乙醇溶出物和乙酸乙酯萃取物体外抑制超氧阴离子(O2-·)、羟自由基(·OH)、DPPH和脂质过氧化(LPO)的功效进行了研究。超氧阴离子(O2-·)由邻苯三酚自氧化体系产生；羟自由基(·OH)由Fenton反应产生；利用Fe2+诱发卵黄脂蛋白产生丙二醛(MDA)，TBA法测定。所有测定均采用分光光度法。结果表明，与已知抗氧化剂L-抗坏血酸相比，乙醇溶出物和乙酸乙酯萃取物均有明显的捕捉自由基和抗氧化能力，而多糖捕捉自由基和抗氧化能力很低，且对O2-·没有抑制作用，反而会增加其生成速度，其机理值得进一步探讨。