【摘 要】
:
当前感染性疾病的严峻现状和生物恐怖的潜在威胁使病原微生物的检测面临严重的挑战。本研究发展了一种新的病原检测方法,称为噬菌体展示介导的免疫扩增病原检测方法。该方法巧
【出 处】
:
中国科学院研究生院(武汉病毒研究所)
论文部分内容阅读
当前感染性疾病的严峻现状和生物恐怖的潜在威胁使病原微生物的检测面临严重的挑战。本研究发展了一种新的病原检测方法,称为噬菌体展示介导的免疫扩增病原检测方法。该方法巧妙地利用了表面展示有单链抗体的重组噬菌体本身具有抗原结合分子和内部含有DNA的特点,通过表面展示的抗体识别目标抗原,利用内部的DNA作为核酸扩增的模板,把重组噬菌体作为载体直接介导完成免疫识别和信号检测过程。根据信号扩增方法的不同,可以分为噬菌体展示介导的免疫PCR和噬菌体展示介导的恒温扩增两种方法。噬菌体展示介导的免疫PCR是一种新型的免疫PCR方法,它利用重组噬菌体作为免疫PCR的载体。以汉坦病毒核蛋白为例,本研究论证了噬菌体展示介导的免疫PCR方法是一种高灵敏的病原检测方法,灵敏度比传统的酶联免疫吸附(ELISA)方法提高1,000-10,000倍,达到10 pg/ml。同时利用Real-time PCR技术结合标准曲线使该方法能够对抗原定量检测。检测结果表明重复性较好,在夹心检测的模式下2,000ng/ml到2 ng/ml的检测范围内R~2值达到0.96。本研究随后用恒温扩增方法代替PCR扩增噬菌体DNA发展噬菌体展示介导的恒温扩增方法,希望能摆脱对热循环仪的依赖。首先尝试噬菌体展示介导滚环扩增方法,该方法检测HIV P24抗原的灵敏度为100 pg/ml,但是所需的时间较长,而且检测的特异性不强。随后采用链置换扩增(strand displacement amplification,SDA)以取代滚环扩增作为信号检测的方法发展了噬菌体展示介导免疫链置换扩增方法。链置换扩增的效率很高,反应时间只需一个小时,检测HIV P24抗原和HBV HBsAg的灵敏度比传统的ELISA方法灵敏度提高1,000-10,000倍,同时结合荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)探针做实时监测,使该方法的特异性大大增强。本研究发展的噬菌体展示介导的免疫扩增检测方法兼具免疫学检测方法的高特异性和核酸扩增方法的高灵敏度,而且成本低廉,有希望推广使用成为一种病原检测的常规方法。
其他文献
回 回 产卜爹仇贱回——回 日E回。”。回祖 一回“。回干 肉果幻中 N_。NH lP7-ewwe--一”$ MN。W;- __._——————》 砧叫]们羽 制作:陈恬’#陈川个美食
Back to yield
为探讨用Yo-Yo间歇恢复能力测试监控少年冰球运动员陆地体能训练的效果,对24名少年冰球运动员陆地体能训练期前后Yo-Yo间歇恢复能力测试结果对比血乳酸、RPE指标进行分析。与
在化学教学过程中,必然会涉及各类化学反应,但是有些教师往往不注意引导学生分析化学反应中的速率问题,学生可能不会认识到由于反应条件的不同反应速率也会出现相应变化这一
目前GPS反演倾斜路径水汽量可以分解为三个部分,天顶的大气可降水量PWV、大气梯度模型模拟的湿延迟项和未被大气梯度模拟的水汽各向异性部分。这三个部分综合起来可以反映水汽场的信息,但它们的演变又表现出不同的特点,因此对它们的时间序列进行统计分析可以了解水汽长期变化特征。利用设在深圳竹子林GPS接收机反演得到的结果分析了它们的变化幅度和时间尺度。
摘要:人类命运共同体思想是超越民族和国家场域为谋求人类共同利益而提出的中国方案,它秉承了中华优秀传统文化基因,是既立足于本国利益,又着眼世界和平、关照世界共同发展的新理念。西方一些政客和媒体深陷“冷战思维”,抓着“霸权主义”“经济强权”“西方中心论”不放,制约了人类命运共同体的构建。我们要坚持文明互鉴,力求达到“美美与共”的新境界,坚持中华文化“走出去”,形成“融突和合”的新格局,坚持提升话语权,
目的考查磷霉素对顺铂肾毒性的影响.方法测定中性磷霉素钠与顺铂合并单次静注后小白鼠生存天数,LD50;通过病 理以及血液学检查,测定对大鼠肾毒性的影响.结果磷霉素对顺铂在未
振兴长春,需优化协同创新体制机制,把"人才强市"列为全市战略,加快科技成果本市转化,集聚优质创新资源,提升产业链现代化水平,发挥科技创新的支撑引领作用,深入实施创新驱动
针对装配式混凝土结构,指出其常见的产生质量问题环节:设计过程、加工生产过程、构件运输堆放过程、组装过程,并分析了各种缺陷的形态,肯定了质量检测的必要性。对构件和构件安装
目的了解天津市百日咳鲍特菌菌株对抗生素敏感性的分布情况及耐药位点变异情况,为百日咳防治提供依据。方法以2012年2月至2017年7月天津市分离的18株百日咳鲍特菌菌株作为研
2017年3月、8月和11月对绵竹市两条典型河流(绵远河与马尾河)5个监测断面表层水样采集,并采用单因子评价法、综合污染指数法和主成分分析法对水质进行评价。河流水体呈弱碱性