【摘 要】
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本实验旨在构建包含CspA冷激启动子的低温表达载体,探讨cspA启动子及其上下游区域的表达调控机制,并通过报告基因cecropinB测定其转录表达活性,同时期望获得CecropinB的高效
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本实验旨在构建包含CspA冷激启动子的低温表达载体,探讨cspA启动子及其上下游区域的表达调控机制,并通过报告基因cecropinB测定其转录表达活性,同时期望获得CecropinB的高效融合表达载体.本论文所使用的CecropinB是黑腹果蝇的一种抗菌肽的前体,含有63个氨基酸序列,其中1-23 aa为信号肽序列.抗菌肽能抵抗果蝇正常生活环境中的各种病原微生物的感染,是自然免疫系统的一部分,可以导致大肠杆菌的死亡.以E. coli基因组DNA为模板扩增了9段具有CspA冷激启动子及其他不同调节元件的片段,用其替换掉pET28a(+)载体上的T7启动子.提取果蝇的总RNA,通过体外反转录获得cDNA,以其为模板,PCR扩增出cecropinB的全长cDNA序列,构建了四个含有冷激启动子以CecropinB为报告基因的表达载体pMBC系列(pMBC2、pMBC3、pMBC4和pMBC5),以及含有T7启动子的cecropinB的表达质粒pCEC.
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