【摘 要】
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呼伦贝尔羊是内蒙古自治区大力发展的绵羊经济品种之一,根据尾部性状可分为两个主要品系:巴尔虎羊（半椭圆状尾）和呼伦贝尔短尾羊（无尾和小桃状尾）。根据对呼伦贝尔羊重测序方面的研究已经确定了T/Brachyury基因的第二个外显子334位和333位的突变可能与呼伦贝尔短尾羊的短尾性状相关,在胚胎发育早期TGF-β家族、成纤维细胞生长因子和激活素等中胚层诱导因子可上调T/Brachyury基因的表达,从而
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呼伦贝尔羊是内蒙古自治区大力发展的绵羊经济品种之一,根据尾部性状可分为两个主要品系:巴尔虎羊（半椭圆状尾）和呼伦贝尔短尾羊（无尾和小桃状尾）。根据对呼伦贝尔羊重测序方面的研究已经确定了T/Brachyury基因的第二个外显子334位和333位的突变可能与呼伦贝尔短尾羊的短尾性状相关,在胚胎发育早期TGF-β家族、成纤维细胞生长因子和激活素等中胚层诱导因子可上调T/Brachyury基因的表达,从而在胚胎中胚层发育中发挥重要作用,而后其表达关闭。基于以上实验背景本实验分为三部分:1.统计25只巴尔虎羊和25只呼伦贝尔短尾羊的平均尾长分别为13.4 cm和23.4 cm。DNA测序后发现25只呼伦贝尔短尾羊群体中的T/Brachyury基因存在少量的杂合子。成功建立了非对称高分辨率熔解曲线方法并对50只呼伦贝尔羊进行基因型鉴定,与DNA测序结果对比后发现非对称高分辨率熔解曲线能够准确的区分呼伦贝尔短尾羊T/Brachyury基因两处突变位点c.G333C与c.G334T的纯合子和杂合子。2.利用SMART RACE对16天短尾羊胚胎T/Brachyury基因进行c DNA全长克隆,c DNA长度为2426 bp,其中3?UTR、3?ploy（A）尾和5?UTR分别为763 bp和328 bp;CDS（蛋白质编码区）为1335 bp,并对CDS序列翻译后的氨基酸序列进行蛋白质理化性质分析,发现BRACHYURY蛋白中Random coil（无规则卷曲）结构占比最多。3.将测序后的T/Brachyury基因完整CDS成功连接至p EASY?-Blunt E1表达载体进行原核表达BRACHYURY蛋白,并摸索蛋白表达条件、纯化目的蛋白并成功制备多克隆兔抗羊BRACHYURY血清抗体,经过ELISA实验鉴定血清抗体最大稀释比为1:1500。同时利用q PCR对呼伦贝尔短尾羊16天、20天、25天和30天胚胎进行T/Brachyury基因表达量的鉴定,结果显示16天胚胎T/Brachyury m RNA表达量最高。
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