论文部分内容阅读
目的探讨抗乙酰肝素酶(heparanase,HPA)单抗对人肺癌A549细胞HPA m RNA、HPA蛋白表达水平以及HPA活性的影响。同时评价抗HPA单抗联合化疗药物紫杉醇对人肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。在抗HPA单抗联合紫杉醇体外抑制人肺癌A549细胞增殖,迁移和侵袭的基础上,建立荷Lewis肺癌小鼠皮下移植瘤模型,探讨抗HPA单抗与紫杉醇单独或联用对移植瘤生长的影响。方法采用RT-PCR和Western blot检测抗HPA单抗对人肺癌A549细胞HPA m RNA和HPA蛋白表达水平的影响;采用四唑蓝比色法和多糖电泳法检测抗HPA单抗对人肺癌A549细胞HPA活性的影响;HPA单抗与紫杉醇单独或联合干预人肺癌A549细胞,采用MTT法检测对人肺癌A549细胞增殖的影响;利用流式细胞术分析人肺癌A549细胞周期和细胞凋亡的改变,通过细胞划痕和Transwell小室实验观察人肺癌A549细胞迁移和侵袭能力的变化。建立荷Lewis肺癌C57BL/6小鼠皮下移植瘤模型,随机分为生理盐水组、鼠Ig G组、抗HPA单抗组、紫杉醇组、抗HPA单抗与紫杉醇联用组。称量小鼠体重,绘制体重变化曲线;测量皮下移植瘤体积,绘制肿瘤生长曲线;称量裸瘤重并计算抑瘤率,评价药物对移植瘤生长的抑制作用。HE染色观察肿瘤组织病理学变化,免疫组织化学检测肿瘤组织微血管密度。结果抗HPA单抗干预后,A549细胞的HPA m RNA和HPA蛋白相对表达水平与溶剂对照组和鼠Ig G组相比降低(P<0.05),A549细胞的HPA的活性与阴性对照组相比降低。抗HPA单抗和紫杉醇单独应用呈浓度依赖性地抑制人肺癌A549细胞增殖,抗HPA单抗(100μg/ml)和紫杉醇(10nmol/L)联用对细胞增殖的抑制作用与任意单药作用组相比增强(P<0.05),呈协同作用。与紫杉醇和抗HPA单抗单独干预相比,抗HPA单抗(100μg/ml)和紫杉醇(10nmol/L)联合干预进一步阻滞人肺癌细胞周期于G2/M期(P<0.01),细胞凋亡比例增加(P<0.01)。抗HPA单抗可以部分增强紫杉醇对人肺癌A549细胞迁移和侵袭能力的抑制作用。抗HPA单抗和紫杉醇单独干预荷Lewis肺癌小鼠后,与生理盐水组和鼠Ig G组相比,肿瘤生长速度减慢,体积减小和瘤重量减轻。抗HPA单抗和紫杉醇联合干预组与生理盐水组和鼠Ig G组相比,对荷Lewis肺癌小鼠皮下移植瘤的生长有明显抑制作用,与抗HPA单抗和紫杉醇单独干预组相比瘤体积和瘤重量均减小。HE染色检查肿瘤形态学变化发现,治疗各组与生理盐水组和鼠Ig G组相比肿瘤细胞生长受到抑制,坏死更为明显。免疫组化发现,抗HPA单抗与生理盐水组相比瘤组织MVD减少,抗HPA单抗和PTX联合干预组与生理盐水组相比瘤组织MVD减少。结论抗HPA单抗部分增强紫杉醇对人肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用。其作用机制可能与抗HPA单抗下调A549细胞HPA m RNA和蛋白表达水平,抑制HPA活性有关。也可能与抗HPA单抗与紫杉醇联用进一步阻滞细胞于G2/M期同时诱导细胞的凋亡有关。抗HPA单抗与紫杉醇联用对荷Lewis肺癌小鼠皮下移植瘤生长的抑制率高于单一药组,抗HPA单抗可能成为潜在的化疗增敏药物。