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背景和目的胰腺癌是一种恶性度极高、预后极差的肿瘤。p53基因是与胰腺癌发生高度相关的抑癌基因,与之相关的p53凋亡刺激蛋白(apoptosis stimulatingprotein of p53,ASPP)是新近发现的一个蛋白家族。包括ASPP1、ASPP2和凋亡刺激蛋白抑制因子(iASPP,inhibitory member of the ASPP family)三个成员,其中iASPP是一种导致肿瘤发生的关键癌蛋白,能够特异性抑制野生型p53诱导目的基因转录活化和促细胞凋亡功能。iASPP是p53最为保守的抑制蛋白,因此是一个非常理想的分子靶。本课题通过人工合成iASPP的反义基因,探讨iASPP反义基因的稳定性以及对胰腺癌细胞的生物学影响;探讨iASPP反义基因与磁性纳米颗粒结合的可能性,并验证磁性纳米颗粒对反义基因的保护作用以及在磁场中能够定向移动的特性。材料和方法首先,通过基因工程的方法,人工设计iASPP的反义基因,并使用DNA合成仪合成iASPP的反义基因。同时,培养胰腺癌细胞SW1990,进行iASPP反义基因在SW1990培养液中稳定性的研究以及对SW1990的增殖及凋亡的影响。其次,通过iASPP反义基因与构建好的磁性纳米颗粒进行耦合,构建iASPP反义基因磁性纳米颗粒,并在电镜下观察磁性纳米颗粒结合反义基因后的磁性纳米颗粒的形态。最后,通过磁性纳米颗粒能够保护iASPP反义基因防止核酸酶的消化试验以及能够在高磁场中定向移动的试验,来鉴定iASPP反义基因磁性纳米颗粒特性。结果人工合成的iASPP的反义基因,末端以硫代磷酸化修饰,在胰腺癌细胞SW1990培养液中至少3天是稳定的,明显抑制肿瘤细胞株的增殖,最高抑制率可高达91.16%。并通过观察细胞周期可看到G0/G1期阻滞增加,S期减少,表明iASPP的反义核酸通过将细胞阻滞在G0/G1期,减少进入S期的细胞数目,减少DNA复制,并导致肿瘤细胞凋亡。这与p53的抑癌作用相似。iASPP的反义基因能够在与磁性纳米颗粒各种质量比的情况下都能较好的结合,电镜下观察可见磁性纳米颗粒呈不规则形状,中心为一铁颗粒,直径＜100nm。在DNA保护试验中能够很好保护反义基因抵御消化酶消化作用:并且能够在磁场中进行定向移动,在施加磁场后的20分钟后,反义基因纳米颗粒定向移动到高磁场区域。结论1.人工合成的iASPP反义寡核苷酸,通过末端的硫代磷酸化修饰在胰腺癌细胞SW1990培养液中是稳定的,不易降解的,并且能改变胰腺癌癌细胞生长状态,抑制细胞增殖,可能对胰腺癌起到一定的治疗作用。2.iASPP寡核苷酸能够通过静电力在一定质量比下与多聚赖氨酸包囊的磁性纳米颗粒相耦合,两者耦合后磁性纳米颗粒能够对寡核苷酸起到保护作用,来抵御消化酶,并且能够在磁场中定向移动。