【摘 要】
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周围神经损伤是生活中常见的疾病,其修复已经成为神经科学的研究热点。当断裂处有缺损时,需要借助神经移植物进行修复和再生。由于自体神经移植来源匮乏、尺寸不匹配,临床上开始采用神经导管桥接缺损严重的神经损伤,而修复的效果同神经导管的结构和性能息息相关。理想的神经导管应该具有良好的生物相容性、适宜的机械强度和生物降解速率。同时,天然神经基底膜具有三维各向异性,包裹神经束在其内实现定向生长。因此,选择合适的
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周围神经损伤是生活中常见的疾病,其修复已经成为神经科学的研究热点。当断裂处有缺损时,需要借助神经移植物进行修复和再生。由于自体神经移植来源匮乏、尺寸不匹配,临床上开始采用神经导管桥接缺损严重的神经损伤,而修复的效果同神经导管的结构和性能息息相关。理想的神经导管应该具有良好的生物相容性、适宜的机械强度和生物降解速率。同时,天然神经基底膜具有三维各向异性,包裹神经束在其内实现定向生长。因此,选择合适的材料,在三维体系内构建长程有序的拓扑结构,并通过调整材料表面的化学性质模拟神经组织的生长环境是一个亟需解决的重要课题。丝素蛋白(SF)提取自天然蚕丝,不仅具有优异的生物相容性,而且机械性能和降解速率可控,降解产物主要是可被人体组织吸收利用的游离氨基酸,因此是制备神经支架的极佳选择。本论文以SF为主体原料,借助单向冷冻技术构筑具有三维各向异性的多通道SF支架,引入含有促细胞黏附RGD肽的烟草花叶病毒突变体TMV-RGD1和导电聚合物PEDOT:PSS,探究基底表面的结构和化学性质对大鼠嗜铬细胞瘤12(PC12)细胞生长行为的影响。在第一部分工作中,我们利用单向冷冻技术构筑了具有多通道结构的三维各向异性SF支架,并且通过改变自组装时间和冷冻温度调节孔道的形貌结构,制备出孔径大小为140±79 μm的适宜支架基底。然后利用“灌注-冻干”法,在支架孔道壁表面引入含有促细胞黏附RGD肽的烟草花叶病毒突变体TMV-RGD1。体外实验发现,PC12细胞能够良好地粘附在SF/TMV-RGD1复合支架上,并且其轴突可以沿孔道纵向生长,表明以TMV-RGD1修饰孔道表面,不仅在化学层面引入了 RGD活性序列,而且在物理层面丰富了基底的各向异性纳米拓扑结构,改善了 SF基底的细胞亲和性并促进了细胞轴突的定向生长。在第二部分工作中,通过“浓缩-稀释”法制备了 SF的纳米纤维溶液,然后单向冷冻该溶液,构筑了表面具有取向SF纤维的支架,进一步丰富了支架的多级取向拓扑结构。接着在支架表面浸涂了一层导电聚合物PEDOT:PSS,发现聚合物溶液中加入十二烷基硫酸钠(SDS)可以进一步提高支架的电导率。研究发现,在具有电活性的SF支架上,PC12细胞能够更好地增殖和分化,并且分化细胞的轴突会沿通道轴向定向伸展,夹角10°以内的占比达85%。本论文为构建表面性质可控的三维多通道神经导管结构提供了简单、有效和普适的方法,为构建临床应用的神经导管提供了理论依据和实验基础。
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