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桑黄是目前发现的生物抗癌领域功效较显著的一种药用真菌,其有效成分一般是从子实体中提取得到的子实体多糖。由于野生桑黄子实体被过度采摘,使野生资源濒临枯竭,加上其人工栽培技术尚不成熟等,远远不能满足医药市场对其的需求。目前虽有人工培育出的子实体,但因技术不成熟,子实体的产量低,质量差,并且尚未能进行产业化生产。
本文以开发利用桑黄这一新兴的药用菌资源,探明其子实体分化发育条件为目的,首先对8个不同来源桑黄菌株(R、H、S6、S7、S8、S、W、S1)菌丝体的生物学特性及生长条件进行了研究,在此基础上对菌株R子实体的分化和发育生长进行探索研究,主要得出以下研究结果。
通过对桑黄菌丝体生物学及培养条件的研究得出,桑黄斜面菌丝体生长较佳的培养基配方为:马铃薯200g,葡萄糖20g,硫酸镁0.5g,琼脂15~20g,维生素B110mg,加水定容至1000mL,pH值自然;较佳的生长条件为:温度27℃~28℃,暗室培养。
对菌丝体的普通染色显微观察结果显示,菌丝在生长到一定时期出现了横隔和锁状联合等特征结构,桑黄菌丝为管状,有分支。对H和S两个菌株弹射出的孢子显微观察结果显示,两个菌株孢子形态相似,均为卵圆形或椭圆形,有同心环,表面光滑,一端有一个小凸起,为萌发孔。
吖啶橙对桑黄菌丝进行荧光染色时,染色条件以pH5.8~6.0,染色时间以4min为宜。由荧光染色结果可以清晰的看到管状菌丝内由绿色至橙红色、红色等不同颜色分布,顶端和横隔处荧光较亮,说明此处DNA和RNA含量较高,这应该与这两处生长、分裂较为旺盛有关系。
对桑黄固体培养菌丝体基质中的羧甲基纤维素酶、漆酶、多酚氧化酶、愈创木酚酶、过氧化物酶等胞外酶的活性进行了测定,结果显示在同一生长时期,每种酶酶活性不同,且同一种酶随生长时期的变化,酶活性也发生变化,表明了桑黄菌丝体对纤维素及木质素两种营养物质的利用情况存在差异。
采用DNS法测定还原糖含量,选用苯酚-硫酸法测定总糖含量。在整个固体培养过程中,总糖含量变化不是很大;还原糖含量变化出现两个高峰期,分别在第17d和第25d。
通过对桑黄固体培养过程的研究,得出桑黄固体菌丝体生长较佳的培养基配方为:棉籽壳78%,麸皮20%,石膏1.5%,硫酸镁0.2%,磷酸二氢钾0.3%,料水比1:1.5;较佳的生长条件为温度27℃~28℃,喑室培养。桑黄菌株(R)子实体较佳的分化及生长条件为昼夜温差培养,空气相对湿度90%~95%,及时通风换气,每天早晚各通风一次,每次通风20min,自然散射光照。综合验证试验结果表明:在此条件下,菌丝生长旺盛,菌丝密,形成的原基数量较多;形成的子实体颜色鲜亮均一,质量好,畸形率低,71~85天即可成熟采摘。单株干重产量在25g~32g之间,平均干重约为28.5g/袋,生物学产量约为8.91%。较单因素试验中产量高。