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目的:非酒精性脂肪肝(Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是与胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR)密切相关的肝损伤性疾病,已成为目前全球最常见的慢性肝病,也是世界公共健康问题之一。研究表明,改善胰岛素抵抗可有效缓解NAFLD。AWRK6是实验室从东北林蛙皮肤分泌物中鉴定并改造的18个氨基酸的阳离子多肽,具有提高机体的胰岛素敏感性,缓解胰岛素抵抗,改善小鼠2型糖尿病等多种功能。本研究拟对AWRK6改善NAFLD的作用进行分析,并进一步对其作用机制进行探究,为NAFLD的治疗提供新策略。方法:利用油酸(OA)诱导HepG2肝细胞内甘油三酯(TG)积累,构建具有NAFLD病征的体外细胞模型。使用MTT法检测细胞存活率,分析细胞内TG含量变化,优化确定AWRK6最佳作用条件(5×10-8 mol/L,4 h),并以5×10-8mol/L AWRK6干预油酸诱导模型细胞4 h,检测细胞内TG含量,在细胞水平评估AWRK6改善NAFLD的作用。同时利用高脂饲料饲养小鼠12周,构建NAFLD小鼠模型,建模成功后将小鼠随机分为NC组(普通饲料)、NAFLD组(阴性对照)、AWRK6组(实验组)和Exendin-4组(阳性对照),NC组、NAFLD组小鼠腹腔注射生理盐水,AWRK6组、Exendin-4组小鼠分别腹腔注射AWRK6(100 nmol/kg)和Exendin-4(10 nmol/kg),连续给药4周,测量体重变化、血清中的生化指标如TC、TG等以及胰岛素含量,计算胰岛素抵抗指数(Homeostasis Model Assessment Of Insulin Resistance,HOMA-IR);利用HE染色和油红O染色分析NAFLD小鼠肝脏病理改变和脂肪颗粒积累情况,在动物水平上分析AWRK6的抗NAFLD作用。进一步应用Western-blot技术检测HepG2细胞以及小鼠的肝脏中腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、p-AMPK、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)和p-ACC的量,分析AWRK6的作用机制。结果:5×10-4 mol/L的油酸处理细胞24 h,HepG2细胞形态改变,细胞培养液中AST、ALT含量增加,细胞中脂质积聚显著,是诱导细胞建模的最佳条件;AWRK6干预可使脂质积累细胞中TG的积聚减少(P<0.001)。在动物水平上,与对照组相比,AWRK6干预组小鼠体重(P<0.01)、肝脏重量(P<0.001)和肝脏系数(P<0.001)显著下降。HOMA-IR获得有效缓解(P<0.001)。AWRK6干预可降低NAFLD小鼠血清胰岛素、LDL-C、TC和TG含量,与对照组相比,差异极其显著(P<0.001),血清中HDL-C含量有所提高(P<0.01)。HE染色、油红O染色结果显示,AWRK6干预组小鼠肝脏病理变化得到明显改善,细胞密度提高,细胞间隙减小,肝脏中的脂肪空泡明显减少,脂质积聚现象得到改善。Western blot分析结果表明,与对照组相比,加入AWRK6后HepG2细胞和小鼠肝脏中p-AMPK、p-ACC的含量显著升高,显著性差异分别为P<0.05和P<0.001,而AMPK和ACC蛋白含量差异不显著(P>0.05)。结论:AWRK6能够降低OA诱导的HepG2细胞内TG含量积聚。在个体水平上,AWRK6可改善胰岛素抵抗,减少脂质积累,具有改善NAFLD的作用。AWRK6可以促进AMPK和ACC蛋白磷酸化,上调p-AMPK、p-ACC的含量,表明AWRK6可通过AMPK/ACC信号通路调节脂质代谢,改善NAFLD。