豌豆根瘤菌结瘤基因转录调控因子NodD蛋白新功能区的研究

来源 :中国科学院上海生物化学和细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:htagsll
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在豌豆根瘤菌,NodD是结瘤基因的主要调控因子,属于LysR转录因子家族蛋白。在功能上,LysR家族蛋白表现为自身负反馈抑制和在诱导剂存在时激活其他操纵子的转录;在结构上,LysR家族蛋白的N端为DNA结合结构域(DBD),具有helix-turn-helix结构,是LysR家族蛋白最为保守的部分,C端为调控结构域(RD),是诱导剂结合的部位。通过对NodD蛋白进行系统的插入突变,发现一个由12氨基酸组成的新功能区。通过同源建模,这个新功能区为NodD的三维结构模型的铰链区。通过改变这个铰链区的长度,得到了七类不同表型的突变体。第一类突变体表现为转录激活和自身负反馈能力均丧失;第二类突变体表现转录激活能力不依赖于诱导剂,自身负反馈能力消失;第三类突变体的转录激活能力只有野生型的12%,自身负反馈能力保持不变;第四类突变体有不依赖于诱导剂的组成型转录激活能力同时具有自身负反馈能力;第五类突变体表现为自身负反馈能力消失,有组成型激活能力,在诱导剂存在时,组成型激活能力大大下降;第六类突变体自身负反馈能力不变,在没有诱导剂时,转录水平高于野生型,在有诱导剂时,诱导比率比野生型高;第七类突变体表现为组成型转录激活能力,但诱导比率低于野生型。为了研究各NodD突变体对DNA弯折的影响,进行了弯折角度的测定,结果表明,七类十二个NodD突变体引起的DNA弯折角度确实存在差异。
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