铝对拟南芥AHA1基因表达模式的影响

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本试验在建立了一种简易的拟南芥无菌直播水培技术的基础上,从转录水平分析了AHAl对铝胁迫的响应。通过转基因技术构建了AHAl启动子::GUS和AHAl启动子::GFP重组载体并转化拟南芥,获得了GUS和GFP转基因植株,对AHAl的时空表达作了研究,进一步通过.AHAl过量表达分析了该基因在铝胁迫下的功能。结果表明: 1)半定量RT-PCR显示,正常生长条件下AHAl在拟南芥根部和地上部都有表达,铝处理明显提高了AHAl在根部和地上部的表达;定量RT-PCR结果表明,铝胁迫下,AHAl在根部和地上部的表达量分别是对照的4.5倍和2.1倍。 2)利用组织化学分析AHAl基因启动子驱动的GUS转基因拟南芥,发现GUS活性主要集中在根、茎、叶、花、荚的维管组织中。GUS染色还显示:在铝胁迫条件下,AHAl活性在根尖、根毛和叶片明显被诱导。 3)AHAl与GFP(绿色荧光蛋白)的融合蛋白定位于细胞膜上,特别是在维管组织的细胞膜上表达更强。在铝胁迫条件下,根尖荧光强度明显增强,与根尖的GUS染色结果一致,暗示了铝胁迫条件下AHAl在根尖的特殊功能。 4)AHAl过量表达植株与野生型相比,在正常生长条件下没有明显的表型差异,但在相同铝处理条件下,转基因植株表现出较长的根伸长量,较少的铝含量和较多的苹果酸和柠檬酸分泌量。铝处理后,转基因材料苹果酸和柠檬酸的分泌量分别是野生型的17l%和168%。 综上所述,AHAl卷入了拟南芥的抗铝胁迫过程,其机理可能是通过转录翻译调控了根尖有机酸的分泌,从而提高其抗铝性。本研究初步阐明了AHAl基因在抗铝胁迫中的调控机理,可为定向选育抗铝能力强的作物品种提供理论依据。
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