诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在血管瘤组织中的定位与表达的研究

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前言 目前已广泛接受Mulliken根据血管内皮细胞及其生物学行为特征把新生儿血管病损化分为血管瘤及血管畸形。血管瘤(hemangioma/angioma)指出生后2-4周后发生的,6-8个月之间快速生长,1岁以后稳定,甚至逐渐消退的体表血管病损。病理特征为增殖期血管内皮细胞过度增殖,肥大细胞增多;消退期变为血管内皮细胞及肥大细胞数目减少,纤维组织较多。血管畸形(vasoular malformation)是出生时就发生的,没有增生倾向,随病人年龄增大,在外伤、感染及内分泌等因素刺激下可增大。病理上,血管内皮细胞及肥大细胞数目正常。不论什么血管病损好发体表,防碍美观及功能,特别血管瘤,虽是良性肿瘤,但确有类似恶性组织的生长特征,目前对它的研究较少。 现已证明,一氧化氮(NO)作为介质、信使和调节因子,广泛地参与神经传导、免疫反应、细胞保护、细胞毒和基因调节等多种生理、病理过程,在多种系统疾病的发生和发展中具有重要作用。NO在肿瘤病理过程中的生物学作用十分复杂,即有促进肿瘤的生长作用,又有抑制肿瘤的作用。由于NO是一种自由基性质的小分子,性质十分活跃,体内代谢时间很短,代谢产物含量很低,对其进行直接检测非常困难,因此目前将研究一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)在肿瘤组织中的定位与表达情况作为主要手段之一评价NO/NOS对肿瘤的生物学作用。NOS以左旋——精氨酸和分子氧为底物,催化生成左旋——胍氨酸和NO。目前根据NOS对钙/钙调素的依赖性不同,将NOS分为三种类型:神经型(neurnal NOS,nNOS),诱导型(inducible NOS,iNOS)和内皮型(6ndothelia NOS,eNOS人 iNOS在生理条件下不表达,在病理条.件下可以被多种细胞因子激活,其活性不依赖于钙/钙调素,作用缓慢而持久,由数小时至数天,储积产生大量NO。iNOS存在于人类多种肿瘤细胞中,并与肿瘤的发生相关。目前有关研究iNOS,在口腔颌面部肿瘤中定位与表达的文献很少,仅有鳞癌,尚未见到iNOS在良性肿瘤及血管瘤组织中的定位与表达方面的文献报导。 本文旨在研究血管瘤及血管畸形,以及血管瘤的不同时期组织中iNOS表达与定位情况,通过免疫组化染色方法,寻找血管瘤及其不同时期与NO/iNOS的相关性,从而判断iNOS在血管瘤不同时期的生物学作用。 实验材料 1.材料:收集N98-2删年中国医科大学第二临床医院57例 10天至 15岁的婴幼儿体表血管瘤病损,经手术切除后的石蜡标本。经组织病理学证实,分为血管瘤 49例增殖早期 11例N-2个月X中期13例问一6个月入晚期8例N-12个月人消退期17例O八 岁入血管畸形8例。 2.试剂:抗iNOS单克隆抗体(SC-0362)和即用型S^HC免疫组化试剂盒由武汉博士德生物工程公司提供。 实验方法 采用免疫组织化学法对标本中iNOS表达进行检测观察,免疫组化工作程序依照试剂来源公司推荐使用的操作步骤进行,iN-OS免疫组化染色以细胞浆出现黄色颗粒为阳性,并进行计算机图像分析。统计学临采用卡方检验,秩和检验。 ·2· 实验结果 1.iNOS表达部位: 血管瘤的不同时期组织均有染色,iNOS染色仅见于血管壁内皮细胞的胞浆,而细胞膜及细胞核以及内皮细胞间质无显色;血管畸形组织可见到血管内皮细胞浆有较弱的染色。 2.iNOS表达程度: 血管瘤各不同时期组织染色不尽相同P<o.05人血管瘤增殖早期的染色为深于血管畸形的浅棕色(双组比P<o.05入血管瘤增殖中期,及消退期为棕色。血管瘤组织的染色程度比血管畸形染色程度深(两组比较P”<O对门。 3·iNOS表达分布: 血管畸形弱表达,血管瘤早期阳性表达,血管瘤增殖中期及消退期呈较高程度的表达,血管瘤增殖晚期为强表达。 讨 论 二.iNOS在肿瘤细胞研究中的地位。 目前研究表明,iNOS在肿瘤病理过程中的生物学作用是通过催化生成的NO来完成JO在肿瘤病理过程中的生物学作用具有双重性,在低浓度时以O通过细胞基因调节作用,参与肿瘤细胞信号传导,增加肿瘤血供,增加血管渗透性,参与肿瘤细胞诱导的免疫抑制和抗T淋巴细胞增殖等作用促进肿瘤的发生和发展;另一方面,在高浓度时0O介导活化免疫细胞的细胞毒作用而选择性杀伤肿瘤细胞,参与诱导肿瘤细胞凋亡过程,抑制肿瘤的发生和清除转移肿瘤细胞等方面又具有抑制肿瘤的作用。 尽管iNOS存在于人体肿瘤细胞中,但肿瘤细胞是否固有地 ·3·表达iNOS,其表达程度较正常组织高还是低,肿瘤细胞的iNOS表达的变化与肿瘤的分期、分级和淋巴结转移等临床资料是否具有相关性。目前尚存争论,一些人认为肿瘤细胞固有地表达iNOS,其表达程度较正常组织高,并且与肿瘤的分期、分级和淋巴结转移呈正相关,另一些人持相反观点。 本研究首次描述了iNOS在良性肿瘤:血管瘤及血管
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