Notch信号通路与生长相关蛋白-43在内侧颞叶癫痫中的作用研究

来源 :北京协和医学院中国医学科学院 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sheena111
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癫痫是一种常见的神经系统疾病,以脑部神经元的过度同步化放电和自发反复性的癫痫发作为主要临床表现。内侧颞叶癫痫(mesial temporal lobe epilepsy, MTLE)是局灶性癫痫的一种,也是最常见的成人期药物难治性癫痫,其反复的痫性放电常常起源于硬化的海马。作为MTLE主要的病理表现,海马硬化(hippocampal sclerosis,HS)以海马区星形胶质细胞增生、神经元丢失、颗粒细胞散布与苔状纤维发芽为主要特征。目前,海马内兴奋性与抑制性平衡的比例上调可促进癫痫发作这一观点被广泛的认可,但是涉及的具体分子机制尚不清楚。近年来有研究表明Notch信号通路对一些海马硬化中出现或与之类似的病理表现有促进作用,且该通路与突触可塑性相关并在神经元活动增强时表达上调。因此,我们选择Notch信号通路来研究其在MTLE发病中的作用可能对于理解该病的发生发展过程有提示意义。在海人酸(Kainic acid, KA)诱导的MTLE小鼠模型和MTLE患者中,我们采用蛋白印迹(western blot)、免疫组化和免疫荧光的方法来探索Notch信号通路中的Jagged1配体、Notch1受体及其发挥生物活性的胞内段NICD1在海马中的表达量变化及空间分布;此外,在MTLE的模型小鼠中,通过注射外源药物Jagged1和DAPT分别激活和抑制Notch信号通路对癫痫发作的影响来探讨Notch信号通路在MTLE中可能的作用机制。结果发现,(1)小鼠单侧海马注射海人酸(Kainate acid, KA)可成功构建MTLE模型;(2)在MTLE患者和模型鼠海马内Notch信号通路均被激活;(3)在MTLE模型鼠中,激活或抑制Notch信号通路可以分别促进或缓解急性期的癫痫发作。结论:Notch信号通路的激活参与到了MTLE的发生发展过程,在癫痫发作的急性期,抑制Notch通路的过度激活具有抗癫痫异常放电的作用。生长相关蛋白-43(GAP-43)及其磷酸化形式(p-GAP-43,41位丝氨酸磷酸化)对于神经元轴树突骨架的稳定与轴突的靶向生长起到重要的调控作用,在本研究中,我们应用内侧颞叶癫痫(MTLE)模型小鼠研究了癫痫发生不同时期GAP-43及p-GAP-43在海马齿状回中表达的时空分布情况。通过构建海人酸(Kainic acid, KA)诱导的MTLE模型小鼠及使用免疫组化、western blot技术,我们检测了GAP-43与p-GAP-43在模型鼠癫痫发生不同时期(5d,2w,5w)海马齿状回中的表达变化。我们发现:1)在正常对照鼠及模型鼠的齿状回、门区和海马内分子层,GAP-43均有较高表达;2)与对照组相比,p-GAP-43在KA诱导癫痫发作后的5d、2w、5w三个时间点中的表达水平逐步下降明显。尽管有报道称GAP-43在颞叶癫痫发生阶段中的表达水平上调,但本工作发现其活性形式磷酸化的GAP-43在齿状回颗粒细胞中的表达水平却随着癫痫发作的时间推移而逐步降低,提示可能与硬化海马的轴树突异常重组过程相关,具体的作用机制有待进一步的研究。
其他文献
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