本文以人乳腺癌MCF-7和BT-20细胞为研究对象,通过与硒酸壳聚糖共培养一定时间后,研究硒酸壳聚糖对人乳腺癌细胞凋亡的影响及可能存在的凋亡机理。本文所用药物硒酸壳聚糖(4827.0 Da)兼备硒与多糖的共同抗癌作用,且已经通过红外确定硒与多糖连接位点。首先,验证硒酸壳聚糖诱导人乳腺癌细胞凋亡的发生。MTT实验结果表明,硒酸壳聚糖能抑制细胞的增殖,且当作用浓度达到100 μg/mL是MCF-7细胞的最佳作用剂量,200 μg/mL时与硒酸壳聚糖共培养时间为24 h其作用效果显著,细胞增殖抑制率可达到70%以上且存在较强的时间剂量依赖关系。但对正常人乳腺细胞Hs 578Bst基本无毒性作用;形态学变化观察到相应浓度的硒酸壳聚糖能诱导乳腺癌细胞形态凋亡;AnnexinV-FITC/PI双染实验中,硒酸壳聚糖与乳腺癌细胞作用指定时间段后,经流式细胞术检测证明硒酸壳聚糖可诱导乳腺癌细胞凋亡且是时间依赖关系;此外,细胞周期的检测结果表明硒酸壳聚糖破坏了乳腺癌细胞分裂周期的连续性,并将MCF-7细胞阻滞在G2/M、S期;BT-20细胞阻滞在S期。其次,探究了乳腺癌细胞在硒酸壳聚糖诱导下的凋亡信号途径。流式细胞术检测硒酸壳聚糖作用下乳腺癌细胞活性氧含量上升以及线粒体跨膜电位逐渐消失。这说明硒酸壳聚糖可诱导乳腺癌细胞凋亡。N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)作为一种抗氧化抑制剂,可以显著减少细胞凋亡,抑制ROS的产生。最后,通过检测相关凋亡蛋白进一步验证凋亡。蛋白免疫印迹(Western blotting)分析了乳腺癌细胞经硒酸壳聚糖作用不同时间后,相关凋亡蛋白的表达情况。综上所述,硒酸壳聚糖对MCF-7和BT-20细胞有明显增殖抑制作用并可以通过线粒体途径诱导其发生凋亡,且对正常人乳腺细胞几乎没有毒性作用。因此,它是一种很有潜力的抗癌活性物质。