羊踯躅根质量评价与体外免疫活性研究

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羊踯躅根是杜鹃花科(Ericaceae)植物羊踯躅(Rhododendron Molle G. Don)的干燥根及根茎,具有抗炎、退热、免疫抑制、镇痛等药理作用,临床曾用于治疗慢性肾小球肾炎以及类风湿性关节炎等。羊踯躅的花和果实在治疗关节炎时因毒性大,使用受限制,本品毒性较小,作用可靠,具有很好的研究开发前景。本课题的主要内容如下:1.首次对羊踯躅根的化学成份进行系统预试验,结果表明,羊踯躅根中含有萜类、甾体类、酚类、鞣质类、糖类以及黄酮类成分,可能含有或者少量含有香豆素及内酯类、蒽醌类和挥发油类成分,为今后羊踯躅根中化学成分的分离鉴定提供依据。2.本文首次尝试用不同的方法测定羊踯躅根中总酚酸的含量,为今后羊踯躅根的质量评价提供依据。运用紫外可见分光光度法测定羊踯躅根中总酚酸的含量。考察了三氯化铁-铁氰化钾显色(PB法)和福林酚显色(F-C法)两种方法,同时,利用福林酚显色考察了原儿茶酸和没食子酸两种对照品,最后选择用福林酚显色,原儿茶酸为对照品测定总酚酸的含量。运用HPLC法同时测定羊踯躅根中原儿茶酸和原儿茶醛的含量。原儿茶酸与原儿茶醛分别在10.65106.50μg/ml和5.2852.80μg/ml浓度范围内与其峰面积成良好的线性关系,r分别为0.9992和0.9990;平均回收率分别为98.3%和102.1%,RSD分别为0.99%和1.01%。3.运用体外脾淋巴细胞实验,对羊踯躅根中九个提取部位进行免疫活性的初筛,分别为水提物,醇提物,醇浸膏大孔树脂50%乙醇洗脱部分(简称50%部分),醇浸膏大孔树脂95%乙醇洗脱部分(简称95%部分),氯仿部分,乙酸乙酯A部分,乙酸乙酯B部分,水提醇沉的沉淀部分和醇部分。本文考察了其对正常小鼠脾淋巴细胞以及ConA/LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖反应的作用。选择了四个对三种细胞增殖反应均有较明显抑制作用的部分,分别是氯仿部分、乙酸乙酯A部分、乙酸乙酯B部分以及95%部分,进行了急性毒性试验,利用0.3%-0.5%的CMC-Na配成混悬液灌胃给药。结果显示四个部分均具有一定的毒性,LD50的大小依次为:95%部分LD50=2981.457mg/kg,乙酸乙酯A部分LD50=1908.497mg/kg,氯仿部分LD50=1080.341mg/kg,乙酸乙酯B部分LD50=887.703mg/kg。利用紫外可见分光光度法测定其中总酚酸和萜类的含量,试图分析其毒性大小原因。总酚酸含量大小顺序大致为:双乙A部分>双乙B部分>95%部分>氯仿部分;萜类相对含量的顺序大致为:氯仿部分>95%部分>双乙B部分>双乙A部分。
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