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目的:检测SPAG6基因在MDS或MDS-AML患者骨髓标本的表达情况,以及构建pGC-SPAG6-shRNA重组慢病毒载体靶向干预SPAG6基因表达,探索SPAG6基因表达水平下调后对骨髓增生异常综合征细胞株SKM-1细胞增殖的影响及其可能的机制。方法:收集MDS或MDS-AML患者骨髓标本21例(MDS 11例,MDS-AML 10例),非癌症患者对照骨髓标本7例。将新鲜的骨髓标本提取单个核细胞,利用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SPAG6 mRNA的相对表达量。对已上传至TCGA数据库的急性髓系白血病(AML)患者的骨髓标本SPAG6 mRNA表达分析及Kaplan-Meier生存曲线分析。实验分为3组:Blank组、NC-LV组及SPAG6-LV组。将设计好的阴性对照空载重组慢病毒载体NC-shRNA及靶基因重组慢病毒载体SPAG6-shRNA转染至对数期SKM-1细胞中,利用倒置荧光显微镜观察各组细胞的转染情况,流式细胞检测术检测细胞转染率,qRT-PCR及Western blotting法验证SPAG6基因干扰效果。利用CCK-8法检测SPAG6基因表达下调的改变对SKM-1细胞增殖活力的影响,流式细胞术检测各组细胞周期和表面分化抗原表达的阳性率,qRT-PCR及Western blotting法检测各组细胞周期及其AKT/FOXO通路的相关基因、蛋白的表达情况。结果:与非癌症患者对照组相比,MDS或MDS-AML患者骨髓标本的SPAG6 mRNA表达水平增高。对已上传至TCGA数据库的AML患者骨髓标本SPAG6 mRNA表达的分析,SPAG6基因的表达存在差异,Kaplan-Meier生存曲线进一步分析,发现高表达SPAG6基因的AML患者总生存期明显短于低表达患者。较Blank组,倒置荧光显微镜下观察到SPAG6-LV组与NC-LV组细胞大量表达绿色荧光,流式细胞术检测各组细胞转染率均可达80%以上,qRT-PCR及Western blotting法检测结果显示降低SPAG6基因的表达成功。CCK-8法表明SPAG6-LV组较Blank组和NC-LV组细胞增殖活力明显降低;流式细胞术结果表明SPAG6-LV组较Blank组和NC-LV组存在G0/G1期阻滞;qRT-PCR及Western blotting法结果表明,SPAG6-LV组周期相关蛋白CDK2、CyclinE1表达降低,p27Kip1表达增高,CyclinD1,CDK4 and CDK6在mRNA水平变化无统计学差异。此外,与Blank组和NC-LV组比较,流式细胞术检测细胞表面分化抗原表达阳性率,SPAG6-LV组CD45~+细胞中CD14抗原的阳性表达率增高。Western blotting结果表明,SPAG6-LV组t-AKT和t-FOXO1表达无明显差异,p-AKT和p-FOXO1表达降低。结论:SPAG6基因可能参与MDS疾病的发生与发展,SPAG6基因高表达可能影响患者总生存期。降低SPAG6基因抑制SKM-1细胞增殖,影响细胞周期和分化,其抗增殖机制可能是通过AKT/FOXO/p27Kip1途径介导的。研究提示在潜在的SPAG6基因靶向治疗中,可能通过AKT/FOXO/p27Kip1途径介导MDS或MDS-AML患者抗增殖治疗。