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毛细管电泳(CE)因具有分离效率高、分析速度快、自动化程度高、使用范围广、样品用量少、分离模式多以及毛细管不易被污染等优点,目前已发展成为药学研究领域一种重要的分离分析技术。本论文利用毛细管电泳技术建立了同时快速测定中药中多种有效成分含量的分析方法,并对药物活性成分与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用进行了研究。
本文综述了毛细管电泳技术的发展、优势及其在中药有效成分研究中的应用情况,主要做了以下几个方面的工作:
1.建立了毛细管区带电泳法同时测定炎可宁片中小檗碱、巴马汀、药根碱、大黄素、大黄酸5种药效成分的方法。采用未涂层弹性石英毛细管(75μm×60cm)为分离通道,以90mmol·L-1三羟甲基氨基甲烷(Tris)-10mmol·L-1柠檬酸(含30%乙腈,pH=8.0)为电泳缓冲溶液,5种被测组分在10min内达到基线分离。各组分的检出限分别为0.10、0.30、0.30、0.20、0.20μg·mL-1,样品加标回收率在95.0%~107%之间。
2.建立了毛细管胶束电动色谱法同时测定连花清瘟胶囊中的甘草苷、芦丁、金丝桃苷、槲皮苷、绿原酸、大黄酸6种药效成分含量的分析方法。以50mmol·L-1十二烷基硫酸钠(SDS)-15mmol·L-1磷酸氢二钠-15mmol·L-1硼酸(含25%异丙醇,pH=8.0)作电泳缓冲溶液,于254nm下紫外检测,实验考察了SDS浓度、电泳缓冲液的pH和浓度,以及有机改性剂等影响因素,通过条件的优化,实现了6种组分的有效分离。各组分的检出限分别为1.5、1.0、0.50、0.50、1.5、0.30μg·mL-1,样品加标回收率在90.0%~108%之间。
3.建立中药复方制剂感冒软胶囊中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、葛根素及黄芩苷4种活性成分同时测定的毛细管胶束电动色谱法。电泳缓冲溶液为:10mmol·L-1磷酸氢二钠-20mmol·L-1硼酸,内含20mmol·L-1SDS及体积分数分别为27%异丙醇和18%乙腈作有机改性剂,4种活性成分都获得基线分离。各组分的检出限分别为0.50、0.80、0.60、1.5μg·mL-1,样品加标回收率在91.0%~109%之间。
4.采用毛细管区带电泳法研究了盐酸麻黄碱、磷酸可待因与BSA的结合常数。在pH7.4、浓度25mmol·L-1Tris-HC1的电泳缓冲溶液及分离电压20kV,紫外检测波长214nm,温度37℃的条件下,测得盐酸麻黄碱、磷酸可待因与BSA的结合常数分别为1.46×104,0.75×104L·mol-1。